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RNA純化原理步驟
日期：2025-11-11 18:26
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摘要：RNA純化原理步驟
TRIZ0L試劑中的主要成分為異硫氰酸胍和苯酚,其中異硫氰酸胍可裂解細(xì)胞,促使核蛋白體的解離,使RN與蛋白質(zhì)分離,并將RNA釋放到溶液中。當(dāng)加入氯仿時(shí),它可抽提酸性的苯酚，而酸性苯酚可促使RNA進(jìn)入水相,離心后可形成水相層和有機(jī)層,這樣RNA與仍留在有機(jī)相中的蛋白質(zhì)和DNA分離開。水相層(無色)主要為RNA,有機(jī)層(黃色)主要為DNA和蛋白質(zhì)。
步驟：
1、細(xì)胞或組織,加入0.4ml TRIZOL試劑后勻漿。
2、室溫靜置5分鐘。
3、加入1/5 TRIZOL試劑體積量的氯仿,劇烈震蕩混勻。
4、室溫靜置5分鐘,12000g 4℃離心15分鐘。
5、將上清液轉(zhuǎn)移至新的離心管中,加入與上清液等體積的異丙醇,顛倒混勻。
6、室溫靜置10分鐘,12000g 4℃離心10分鐘,棄上清。
7、向沉淀中加入1ml的75%乙醇的清洗沉淀，12000g 4℃離心5分鐘。
8、棄上清保留沉淀,干燥。
9、沉淀物溶解于11μl的DEPC處理水中。