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豬ELISA試劑盒操作步驟及注意事項(xiàng)
日期：2025-10-29 09:09
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摘要：豬ELISA試劑盒是一種專門用于檢測豬體內(nèi)特定蛋白質(zhì)或抗體的酶聯(lián)mianyi吸附試驗(yàn)（ELISA）試劑盒。這種試劑盒通常用于診斷豬的特定**，如偽狂犬病。
豬ELISA試劑盒是一種專門用于檢測豬體內(nèi)特定蛋白質(zhì)或抗體的酶聯(lián)mianyi吸附試驗(yàn)（ELISA）試劑盒。這種試劑盒通常用于診斷豬的特定**，如偽狂犬病。正確操作豬ELISA試劑盒需要遵循以下步驟和注意事項(xiàng)：
一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
1、?試劑與器材
?試劑盒組分?：包括包被板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)記抗體、洗滌液、底物（TMB）、終止液等，需按說明書核對(duì)。
?器材?：酶標(biāo)儀（450nm）、移液器（0.5-1000μL）、37℃恒溫箱、洗板機(jī)或洗瓶。
?洗滌液配制?：濃縮洗滌液需按比例稀釋（如1:19或1:24），現(xiàn)配現(xiàn)用。
2、?樣本處理
血清/血漿：離心去雜質(zhì)（3000rpm，10分鐘），避免溶血。
組織樣本：需勻漿后稀釋（如1g組織+10mL稀釋液）。
二、檢測步驟
1、加樣和孵育：
在酶標(biāo)板上設(shè)空白對(duì)照1孔、陰性/陽性對(duì)照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
空白對(duì)照孔加樣品稀釋液100μl；陰、陽性對(duì)照孔分別加入陰、陽性對(duì)照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
混勻后，置37℃反應(yīng)30分鐘。
2、加酶標(biāo)記物和孵育：
每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外），37℃反應(yīng)30分鐘。
再次洗滌5次，拍干。
三、洗滌：
扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，拍干。
四、顯色：
每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，37℃避光反應(yīng)10分鐘。
五、終止反應(yīng)：
每孔加終止液50μl，混勻。
六、結(jié)果讀?。?/b>
用空白孔調(diào)零，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。
七、操作注意事項(xiàng)：
1、試劑使用：不同批號(hào)的試劑不要混用，未使用的試劑應(yīng)儲(chǔ)存于2-8℃。
2、設(shè)備檢查：定期檢查酶標(biāo)儀和微量移液器的精度和準(zhǔn)備度。
3、樣本處理：避免直接接觸終止液和底物A、B液；樣本不立即使用時(shí)應(yīng)分裝保存。
4、加樣時(shí)避免刮擦板底，確保加樣量準(zhǔn)確，加樣器吸頭需清洗干凈。
5、試劑應(yīng)妥善保存于4℃冰箱內(nèi)，使用時(shí)先平衡至室溫，不同批號(hào)的試劑組分不宜交叉使用。
6、標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R 值應(yīng)大于等于 0.9600，特異性不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)，重復(fù)性板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于 15%。
通過遵循這些步驟和注意事項(xiàng)，可以確保豬ELISA試劑盒的正確操作，獲得準(zhǔn)確可靠的檢測結(jié)果。
一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備
1、?試劑與器材
?試劑盒組分?：包括包被板、標(biāo)準(zhǔn)品、酶標(biāo)記抗體、洗滌液、底物（TMB）、終止液等，需按說明書核對(duì)。
?器材?：酶標(biāo)儀（450nm）、移液器（0.5-1000μL）、37℃恒溫箱、洗板機(jī)或洗瓶。
?洗滌液配制?：濃縮洗滌液需按比例稀釋（如1:19或1:24），現(xiàn)配現(xiàn)用。
2、?樣本處理
血清/血漿：離心去雜質(zhì)（3000rpm，10分鐘），避免溶血。
組織樣本：需勻漿后稀釋（如1g組織+10mL稀釋液）。
二、檢測步驟
1、加樣和孵育：
在酶標(biāo)板上設(shè)空白對(duì)照1孔、陰性/陽性對(duì)照各2孔，未用的板條盡快密封，2～8℃保存。
空白對(duì)照孔加樣品稀釋液100μl；陰、陽性對(duì)照孔分別加入陰、陽性對(duì)照100μl；樣品孔每孔加入稀釋后的樣品100μl。
混勻后，置37℃反應(yīng)30分鐘。
2、加酶標(biāo)記物和孵育：
每孔加酶標(biāo)記物100μl（空白孔除外），37℃反應(yīng)30分鐘。
再次洗滌5次，拍干。
三、洗滌：
扣去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，重復(fù)洗滌5次，拍干。
四、顯色：
每孔依次加底物液A、底物液B各50μl，混勻，37℃避光反應(yīng)10分鐘。
五、終止反應(yīng)：
每孔加終止液50μl，混勻。
六、結(jié)果讀?。?/b>
用空白孔調(diào)零，于450nm(可用630nm作參比波長）測定各孔吸光值（A值）。
七、操作注意事項(xiàng)：
1、試劑使用：不同批號(hào)的試劑不要混用，未使用的試劑應(yīng)儲(chǔ)存于2-8℃。
2、設(shè)備檢查：定期檢查酶標(biāo)儀和微量移液器的精度和準(zhǔn)備度。
3、樣本處理：避免直接接觸終止液和底物A、B液；樣本不立即使用時(shí)應(yīng)分裝保存。
4、加樣時(shí)避免刮擦板底，確保加樣量準(zhǔn)確，加樣器吸頭需清洗干凈。
5、試劑應(yīng)妥善保存于4℃冰箱內(nèi)，使用時(shí)先平衡至室溫，不同批號(hào)的試劑組分不宜交叉使用。
6、標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù) R 值應(yīng)大于等于 0.9600，特異性不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)，重復(fù)性板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于 15%。
通過遵循這些步驟和注意事項(xiàng)，可以確保豬ELISA試劑盒的正確操作，獲得準(zhǔn)確可靠的檢測結(jié)果。