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第6年

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產(chǎn)品詳情

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產(chǎn)品名稱： 2×Pfu PCR MasterMix(不含染料)
產(chǎn)品型號： 5×1ml
產(chǎn)品廠商：通蔚生物
產(chǎn)品價(jià)格：563
折扣價(jià)格：102
產(chǎn)品文檔：

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簡單介紹：

2×Pfu PCR MasterMix(不含染料)本產(chǎn)品包含 Pfu DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 的增強(qiáng)劑和優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑，濃度為 2 ×。具有快速簡便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，可限度的減少人為誤差。適用于高保真 PCR、復(fù)雜模板如GC 含量高（>60%），有二級結(jié)構(gòu)的擴(kuò)增和大規(guī)?；驒z測。

詳情介紹：

2×Pfu PCR MasterMix(不含染料)

產(chǎn)品特點(diǎn)

本產(chǎn)品包含 Pfu DNA 聚合酶、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液、PCR 的增強(qiáng)劑和優(yōu)化劑以及穩(wěn)定劑，濃度為 2 ×。具有快速簡便、靈敏度高、特異性強(qiáng)、穩(wěn)定性好等優(yōu)點(diǎn)，可限度的減少人為誤差。適用于高保真 PCR、復(fù)雜模板如GC 含量高（>60%），有二級結(jié)構(gòu)的擴(kuò)增和大規(guī)?；驒z測。

它具有下列特點(diǎn)：

1. 顯著提高 PCR 的特異性和靈敏度；

2. 多次凍融或長期放于 4℃不會影響活性；

3. 快速簡便，大大降低勞動(dòng)強(qiáng)度和取樣誤差，而且加入了高性能的PCR增強(qiáng)劑和優(yōu)化劑，降低了對 PCR 條件的要求；

4. 分含染料和不含染料兩種體系。含染料的 MasterMix 產(chǎn)品在PCR結(jié)束后可以直接電泳，無需加入上樣緩沖液。

成分規(guī)格

產(chǎn)品名稱	規(guī)格
2×Pfu PCR MasterMix(含染料)	1ml/5×1ml
2×Pfu PCR MasterMix(不含染料)	1ml/5×1ml
-20℃可長期保存，多次凍融不會影響活性。如需經(jīng)常使用，可存放于 4℃。
本產(chǎn)品僅供科研使用　，不得用于其它用途

使用方法

（注意：以下舉例為常規(guī)PCR體系和反應(yīng)條件，實(shí)際操作中應(yīng)根據(jù)模板、引物結(jié)構(gòu)和目的片段大小不同進(jìn)行相應(yīng)的調(diào)整和優(yōu)化）

1. PCR體系

推薦反應(yīng)體系(20μl)

試劑

用量

模板ＤＮＡ

＜1ug

Primer1(10μM)

0.5μl

Primer2(10μM)

0.5μl

2×Pfu PCR MasterMix

10μl

ddH2O

Up to 20μl

（注意：引物濃度請以終濃度 0.1 - 1.0 uM 作為設(shè)定范圍的參考。擴(kuò)增效率不高的情況下，可提高引物的濃度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)，可降低引物濃度，由此優(yōu)化反應(yīng)體系）

2. PCR程序

過程		溫度	時(shí)間
預(yù)變性		94℃	2min
25－35cycles	變性	94℃	30sec
	退火	55-65℃	30sec
	延伸	72℃	60sec/kb
延伸		72℃	5min

注意：

A 一般實(shí)驗(yàn)中退火溫度比擴(kuò)增引物的熔解溫度 Tm 低 5℃，無法得到理想的擴(kuò)增效率時(shí)，適當(dāng)降低退火溫度；發(fā)生非特異性反應(yīng)時(shí)，提高退火溫度，由此優(yōu)化反應(yīng)條件。

B 延伸時(shí)間應(yīng)根據(jù)所擴(kuò)增片段大小設(shè)定，Pfu DNA Polymerase 的擴(kuò)增效率為1 kb/min。

C 可根據(jù)擴(kuò)增產(chǎn)物的下游應(yīng)用設(shè)定循環(huán)數(shù)。如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，錯(cuò)配機(jī)率會增加，非特異性背景嚴(yán)重。所以，在保證產(chǎn)物得率的前提下，應(yīng)盡量減少循環(huán)次數(shù)）

3. 結(jié)果檢測

反應(yīng)結(jié)束后取5μl反應(yīng)產(chǎn)物，加入適量上樣緩沖液（含染料的不用加），然后進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳檢測。

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