乳酸脫氫酶(LDH)測(cè)試盒

測(cè)定方法:  微量法

測(cè)定規(guī)格:  100管/48樣

保存條件:  低溫避光保存

有 效 期:   6個(gè)月

注    意:   正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義:

LDH(EC 1.1.1.27)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是糖酵解途徑的末端酶,催化丙酮酸與乳酸之間的可逆反應(yīng),伴隨著NAD+/NADH之間互變。

測(cè)定原理:

LDH催化NAD+氧化乳酸生成丙酮酸,丙酮酸進(jìn)一步與2, 4 - 二硝基苯肼作用生成丙酮酸二硝基苯腙,在堿性溶液中顯棕紅色,顏色深淺與丙酮酸濃度成正比。

需自備的儀器和用品:

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。

樣品測(cè)定的準(zhǔn)備:

1、細(xì)胞或組織樣品的制備:

培養(yǎng)細(xì)胞:先收集或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為1000~5000:1的比例(建議2000萬或細(xì)胞加入1mL提取液),超聲波破碎細(xì)-菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次);8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

組織:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。

2、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。