大鼠 ELISA 試劑盒是一種用于檢測大鼠體內(nèi)特定蛋白質(zhì)、抗原或抗體的實驗工具，廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究、開發(fā)等領(lǐng)域。以下是關(guān)于大鼠 ELISA 試劑盒的詳細說明：
檢測原理：以雙抗體夾心 ELISA 法為例，用抗大鼠目標(biāo)分子的抗體包被于酶標(biāo)板上，樣品或標(biāo)準品中的目標(biāo)分子與包被抗體結(jié)合，游離成分被洗去。依次加入生物素化的抗大鼠目標(biāo)分子抗體和辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素，形成免疫復(fù)合物，再次洗去游離成分。加入顯色底物（TMB），TMB 在辣根過氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍色，加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長處測 OD 值，目標(biāo)分子濃度與 OD450 值之間呈正比，通過繪制標(biāo)準曲線計算出樣品中目標(biāo)分子的濃度。
試劑盒組成：以 96 孔配置的大鼠單胺氧化酶 A（MAOA）ELISA 試劑盒為例，通常包括 96 孔酶標(biāo)板、塑料膜板蓋、標(biāo)準品、標(biāo)準品稀釋緩沖液、生物素標(biāo)記的抗體、酶標(biāo)記物、洗滌緩沖液、底物 A、底物 B、終止液、標(biāo)本稀釋液等。
規(guī)格與保存：常見規(guī)格有 96T 和 48T。保存溫度一般為 2-8℃，有效期通常為 6 個月。
樣本要求：可檢測的樣品形式包括血清、血漿、組織勻漿、細胞培養(yǎng)上清、相關(guān)生物液體等。樣品如果不立即分析，應(yīng)分裝后冷凍保存，且避免反復(fù)凍融。如血清需使用不含熱原的試管，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心 10 分鐘將血清和紅細胞分離；血漿可用 EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝，3000 轉(zhuǎn)離心 30 分鐘取上清等。
操作步驟：
準備工作：試劑盒從冰箱取出后，需在室溫平衡 20 分鐘。
加樣：設(shè)置標(biāo)準品孔和樣本孔，標(biāo)準品孔各加不同濃度的標(biāo)準品 50μL；樣本孔加待測樣本 50μL，若樣本需要稀釋，先加待測樣本 10μL，再加樣本稀釋液 40μL，空白孔不加。
溫育：除空白孔外，標(biāo)準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體 100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育 60min。
洗板：手工洗板時，甩盡孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡孔內(nèi)液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5 次；自動洗板機則每孔注入洗液 350μL，浸泡 1min，洗板 5 次。
顯色：每孔加入底物 A、B 各 50μL，37℃避光孵育 15min。
終止：每孔加入終止液 50μL。
測定：15min 內(nèi)，在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。
計算：在 Excel 工作表中，以標(biāo)準品濃度作橫坐標(biāo)，對應(yīng) OD 值作縱坐標(biāo)，繪制出標(biāo)準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣本濃度值。
注意事項：
實驗中不用的板條應(yīng)立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。
濃度為 0 的 S0 號標(biāo)準品即可視為陰性對照或者空白；若樣本已經(jīng)稀釋，結(jié)果需乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)才是樣本實際濃度。
嚴格按照說明書中標(biāo)明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

所有液體組分使用前充分搖勻。

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