高效液相色譜儀測(cè)定食品中蘇丹紅染料的含量
1、范圍
本標(biāo)準(zhǔn)適用于食品中蘇丹紅染料的檢測(cè)。
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了食品中蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ的高效液相色譜儀測(cè)定方法。
方法*低檢測(cè)限：蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ均為 10 ug/ kg 。
2、術(shù)語和定義
蘇丹紅：屬偶氮系列化工合成染料。
3、方法要點(diǎn)
樣品經(jīng)溶劑提取、固相萃取凈化后，用反相高效液相色譜儀—紫外可見光檢測(cè)器進(jìn)行色譜分析，采用外標(biāo)法定量。
4、試劑與標(biāo)準(zhǔn)品
4. 1 乙腈 色譜純
4. 2 丙酮 色譜純、分析純
4. 3 甲酸 分析純
4. 4 乙醚 分析純
4. 5 正己烷 分析純
4. 6 無水硫酸鈉 分析純
4. 7 層析柱管：1cm（內(nèi)徑）× 5cm(高)的注射器管。
4. 8 層析用氧化鋁（中性 100 目～200 目）： 105℃ 干燥 2h，于干燥器中冷至室溫，每 100g 中加入 2mL水降活，混勻后密封，放置 12h后使用。
4. 9 氧化鋁層析柱：在層析柱管底部塞入一薄層脫脂棉，干法裝入處理過的氧化鋁至 3 cm 高，輕敲實(shí)后加一薄層脫脂棉，用 10mL正己烷預(yù)淋洗，洗凈柱中雜質(zhì)后，備用。
4. 10 5%丙酮的正己烷液：吸取 50mL 丙酮用正己烷定容至 1L。
4. 11 標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ；純度≥95%
4. 12 標(biāo)準(zhǔn)貯備液：分別稱取蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ及蘇丹紅Ⅳ各 10. 0mg（按實(shí)際含量折算），用乙醚溶解后用正己烷定容至 250mL。
5、儀器與設(shè)備
5. 1 高效液相色譜儀（ 配有紫外可見光檢測(cè)器）
5. 2 分析天平：感量 0.1mg
5. 3 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀
5. 4 均質(zhì)機(jī)
5. 5 離心機(jī)
5. 6 0.45μm有機(jī)濾膜
6、樣品制備
將液體、漿狀樣品混合均勻，固體樣品需磨細(xì)。
7、操作方法
7. 1 樣品處理
7. 1. 1 紅辣椒粉等粉狀樣品
稱取1 g～5g（準(zhǔn)確至0. 001g）樣品于三角瓶中，加入10mL～30mL正己烷，超聲5mi n，過濾，用10mL正己烷洗滌殘?jiān)鼣?shù)次，至洗出液無色，合并正己烷液。
用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至5mL以下，慢慢加入氧化鋁層析柱中，為保證層析效果，在柱中保持正己烷液面為2mm左右時(shí)上樣，在全程的層析過程中不應(yīng)使柱干涸，用正己烷少量多次淋洗濃縮瓶，一并注入層析柱。
控制氧化鋁表層吸附的色素帶寬宜小于0. 5cm，待樣液完全流出后，視樣品中含油類雜質(zhì)的多少用10mL～30mL正己烷洗柱，直至流出液無色，棄去全部正己烷淋洗液，用含5%丙酮的正己烷60mL洗脫，收集、濃縮后，用丙酮轉(zhuǎn)移并定容至5mL，經(jīng)0. 45μm有機(jī)濾膜過濾后待測(cè)。
7. 1. 2 紅辣椒油、火鍋料、奶油等油狀樣品
稱取0. 5 g～2g（準(zhǔn)確至0. 001g）樣品于小燒杯中，加入適量正己烷溶解（約1 mL～10mL），難溶解的樣品可于正己烷中加溫溶解。按7. 1. 1中“慢慢加入到氧化鋁層析柱??過濾后待測(cè)”操作。
7. 1. 3 辣椒醬、番茄沙司等含水量較大的樣品
稱取10 g～20g（準(zhǔn)確至0. 01g）樣品于離心管中，加10mL～20mL水將其分散成糊狀，含增稠劑的樣品多加水，加入30mL正己烷：丙酮 = 3：1，勻漿5mi n, 3000rpm離心10mi n, 吸出正己烷層，于下層再加入20mL×2次正己烷勻漿，離心，合并3次正己烷，加入無水硫酸鈉5g 脫水，過濾后于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸干并保持5分鐘，用5mL正己烷溶解殘?jiān)螅?. 1. 1中“慢慢加入到氧化鋁層析柱??過濾后待測(cè)”操作。
7. 1. 4 香腸等肉制品
稱取粉碎樣品10g～20g（準(zhǔn)確至0. 01g）于三角瓶中，加入60mL正己烷充分勻漿5mi n，濾出清液，再以20mL×2次正己烷勻漿，過濾。合并3次濾液，加入5g無水硫酸鈉脫水，過濾后于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上蒸至5mL以下，按7. 1. 1中“慢慢加入到氧化鋁層析柱中??過濾后待測(cè)”操作。
7. 2 推薦色譜條件
7. 2. 1 儀器條件
色譜柱： C18 3.5 μm 4. 6mm×150mm
流動(dòng)相：
A：0.1%甲酸的水溶液：乙腈 = 85：15
B ：0.1%甲酸的乙腈溶液：丙酮=80：20
梯度洗脫：
流速:1mL/min
柱溫：30℃
檢測(cè)波長：蘇丹紅Ⅰ 478nm ；蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ 520nm ；于蘇丹紅Ⅰ出峰后切換。
進(jìn)樣量 10μl 。
7. 2. 2 標(biāo)準(zhǔn)曲線
吸取標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液0、0. 1、0. 2、0. 4、0. 8、1. 6mL ，用正己烷定容至25mL，此標(biāo)準(zhǔn)系列濃度為0、0. 16、0. 32、0. 64、1. 28、2. 56μg/ mL, 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
7. 3 計(jì)算
按公式（1）計(jì)算蘇丹紅含量
R=C × V / M ······（1）
R —樣品中蘇丹紅含量，單位為毫克每千克（mg/ kg）；
C —由標(biāo)準(zhǔn)曲線得出的樣液中蘇丹紅的濃度，單位為微克每毫升(μg/ mL)；
V —樣液定容體積，單位為毫升（mL）；
M —樣品質(zhì)量，單位為克（g）
高效液相色譜儀測(cè)定食品中蘇丹紅染料的含量
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