細(xì)胞計(jì)數(shù)實(shí)驗(yàn)

一、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?

掌握細(xì)胞計(jì)數(shù)的方法和操作要領(lǐng)。

二、實(shí)驗(yàn)用品

血球計(jì)數(shù)板、載玻片、蓋玻片、吸管、試管架、eppendorf管、吸頭、吸頭盒、普通顯微鏡、細(xì)胞懸液。

三、實(shí)驗(yàn)方法

1. 取一副血球計(jì)數(shù)板，將計(jì)數(shù)板載玻片、蓋玻片洗干凈，擦干。將蓋玻片蓋在計(jì)數(shù)板上。

2. 取移液管一支，伸入培養(yǎng)瓶中，輕輕用移液管將細(xì)胞懸液混勻（反復(fù)吸放移液管橡膠頭），然后吸取少量懸液滴一滴于蓋玻片與計(jì)數(shù)板載玻片的邊緣上，利用溶液的虹吸現(xiàn)象，使其自動(dòng)流入計(jì)數(shù)室內(nèi)。懸液注入量不應(yīng)過多或過少，計(jì)數(shù)室內(nèi)不應(yīng)有氣泡。滴液不當(dāng)和產(chǎn)生大量氣泡，則須重新洗凈計(jì)數(shù)板，擦干后再次滴入細(xì)胞懸液，否則影響細(xì)胞計(jì)數(shù)。

3. 懸液滴入計(jì)數(shù)室后，靜置2～3分鐘，待細(xì)胞在計(jì)數(shù)室中下沉后，再在低倍鏡下觀察計(jì)數(shù)。依照白細(xì)胞計(jì)數(shù)法，數(shù)計(jì)數(shù)板四角的大方格內(nèi)的細(xì)胞總數(shù)，計(jì)數(shù)時(shí)應(yīng)循一定的路徑，以免遺漏或重復(fù)計(jì)數(shù)，對壓在格子線上的細(xì)胞，根據(jù)“數(shù)上不數(shù)下，數(shù)左不數(shù)右”的原則進(jìn)行計(jì)數(shù)。然后按下式計(jì)算出每毫升細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)。

     細(xì)胞數(shù)/ml=(四大格中的細(xì)胞總數(shù)/4)x104

   每人至少重復(fù)計(jì)數(shù)2～3次，取其平均數(shù)。如細(xì)胞原液經(jīng)過稀釋，則稀釋液的細(xì)胞數(shù)乘以稀釋倍數(shù)，即為細(xì)胞原液的細(xì)胞數(shù)。