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		原代細(xì)胞的培養(yǎng)條件: 
	
	
		
① 靜置貼壁細(xì)胞(包括半貼壁細(xì)胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
a 細(xì)胞要通過(guò)充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性
b 細(xì)胞接種時(shí)濃度要稍大一些,至少為5×108細(xì)胞/L。
c 培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng)。
d 胎牛血清濃度為10%-80%。
e 應(yīng)在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。。
f 在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細(xì)胞發(fā)生脫落,漂浮。
g 待細(xì)胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應(yīng)將原代細(xì)胞換液
h 用骨髓或外周血中的懸浮細(xì)胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時(shí),應(yīng)將細(xì)胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
② 懸浮細(xì)胞的培養(yǎng)要求
a 原代培養(yǎng)時(shí)要盡量去除紅細(xì)胞
b 短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進(jìn)行
c 細(xì)胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進(jìn)行分瓶試驗(yàn)。
d 長(zhǎng)期培養(yǎng)時(shí),細(xì)胞中要加入生長(zhǎng)因子,白血病細(xì)胞中要加入少量的原患者血清,以利細(xì)胞生長(zhǎng)。
f 細(xì)胞換液一般每隔3天需半量換液一次
g 細(xì)胞傳代一般待細(xì)胞增殖加快、細(xì)胞密度較高時(shí)才能進(jìn)行。