原代細胞的培養(yǎng):
(1)原代細胞的培養(yǎng)方法
原代細胞的培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng)是從供體取得組織細胞在體外進行的培養(yǎng),是建立細胞系的步,是一項基本技術(shù)。
原代細胞接近和能反映體內(nèi)生長特性,適宜用于敏感性試驗、細胞分化等實驗研究。
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
② 消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和細胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
大鼠肝kupffer細胞
商品屬性:
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組織來源
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肝組織
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規(guī)格
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5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
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細胞分類
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大鼠原代細胞
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培養(yǎng)條件
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氣相:空氣,95%;CO2,5%
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生長特性
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貼壁培養(yǎng)
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細胞形態(tài)
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圓形
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細胞簡介:
肝 kuffer細胞位于肝血竇腔內(nèi),具有變形運動和活躍的吞噬功能,還具有處理和傳遞抗原、調(diào)節(jié)機體應(yīng)答等作用,屬單核吞噬細胞系統(tǒng)主要成員。是及其從而拮抗感染的重要防御細胞,同時也通過釋放各種炎癥介質(zhì),在內(nèi)性肝損傷的發(fā)生中發(fā)揮主導作用
。
細胞特性:
1)組織來源于實驗動物的正常肝組織。
2)細胞鑒定:巨噬細胞標志物(F4/80)熒光染色為陽性。
3)經(jīng)鑒定細胞純度高于90%。
4)不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、、酵母和。
5)細胞生長方式:圓形,不規(guī)則細胞,貼壁培養(yǎng)。
推薦培養(yǎng)基:
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鋅指蛋白結(jié)構(gòu)域ZFYVE21抗體 ZFYVE21
嗅覺受體52N1抗體 OR52N1
Rab11家族相互作用蛋白5抗體 RAB11FIP5
Ras樣蛋白A+B抗體 RALA+RALB
絲氨酸/蘇氨酸激酶36融合源蛋白抗體 STK36
松弛肽2/松弛素2抗體 Relaxin 2
肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白HECW1抗體 HECW1
甲基CpG結(jié)合域蛋白3樣2抗體 MBD3L2
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原代細胞的分離方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料,簡單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層,這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料,由于細胞間結(jié)合緊密,為了使組織中的細胞充分分散,形成細胞懸液,可采用機械分散法(物理裂解)和消化分離法。
(一)機械分散法
特點:簡便、快速,但對組織機械損傷大,而且細胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。
(二)消化分離法
組織消化法是把組織剪切成較小團塊(或糊狀),應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動,使團塊膨松,由塊狀變成絮狀,此時再采用機械法,用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩,使細胞團塊得以較充分的分散,制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液,接種培養(yǎng)后,細胞容易貼壁生長。
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