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原代細胞的培養(yǎng)條件:

① 靜置貼壁細胞(包括半貼壁細胞的培養(yǎng))培養(yǎng)
a 細胞要通過充分漂洗,以盡量除去消化液的毒性
b 細胞接種時濃度要稍大一些,至少為5×108細胞/L。
c 培養(yǎng)基可用Eagle(MEM Corning 10-010-CVR)或DMEM(Corning 10-013-CVR)培養(yǎng)。
d 胎牛血清濃度為10%-80%。
e 應在37℃5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。。
f 在起始的2天中盡量減少振蕩,以防止剛貼壁的細胞發(fā)生脫落,漂浮。
g 待細胞基本貼壁伸展并逐漸形成網(wǎng)狀,應將原代細胞換液
h 用骨髓或外周血中的懸浮細胞經(jīng)靜置培養(yǎng)1周時,應將細胞懸液經(jīng)低速離心后換液。
② 懸浮細胞的培養(yǎng)要求
a 原代培養(yǎng)時要盡量去除紅細胞
b 短期培養(yǎng),可在含10%小牛血清的RPMI1640培養(yǎng)基中進行
c 細胞濃度可在5-8×109/L范圍內(nèi),進行分瓶試驗。
d 長期培養(yǎng)時,細胞中要加入生長因子,白血病細胞中要加入少量的原患者血清,以利細胞生長。
f 細胞換液一般每隔3天需半量換液一次
g 細胞傳代一般待細胞增殖加快、細胞密度較高時才能進行。