原代細胞的培養(yǎng):
(1)原代細胞的培養(yǎng)方法
原代細胞的培養(yǎng)也叫初代培養(yǎng)是從供體取得組織細胞在體外進行的培養(yǎng),是建立細胞系的步,是一項基本技術(shù)。
原代細胞接近和能反映體內(nèi)生長特性,適宜用于敏感性試驗、細胞分化等實驗研究。
① 組織塊培養(yǎng)法
組織塊培養(yǎng)是常用、簡便易行和成功率較高的原代培養(yǎng)方法。其基本方法是將剪成的小組織團塊接種于培養(yǎng)瓶(或皿)中,瓶壁可預(yù)先涂以膠原薄層,以利于組織塊粘著于瓶壁,使周邊細胞能沿瓶壁向外生長。
② 消化培養(yǎng)法
③ 懸浮細胞培養(yǎng)法
對于懸浮生長的細胞,如白血病細胞、骨髓細胞、胸水和腹水中的癌細胞和細胞無需消化,可采用低速離心分離,直接培養(yǎng),或經(jīng)細胞分層液分離后接種培養(yǎng)。
④器官培養(yǎng)
器官培養(yǎng)是指從供體取得器官或組織塊后,不進行組織分離而直接在體外的特定環(huán)境條件下培養(yǎng),器官培養(yǎng)可保持器官組織的相對完整性,可用于重點觀察細胞間的聯(lián)系、排列情況和相互影響,以及局部環(huán)境的生物調(diào)節(jié)作用。
兔滑膜成纖維細胞
商品屬性:
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組織來源
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滑膜
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規(guī)格
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5×10?Cells/T25培養(yǎng)瓶
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細胞分類
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兔原代細胞
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培養(yǎng)條件
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氣相:空氣,95%;CO2,5%
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生長特性
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貼壁
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細胞形態(tài)
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成纖維細胞樣
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細胞簡介:
兔滑膜成纖維細胞分離自滑膜組織;滑膜組織是位于關(guān)節(jié)腔內(nèi)面的內(nèi)襯結(jié)構(gòu),各種關(guān)節(jié)內(nèi)均會累及滑膜。而滑膜細胞是維持關(guān)節(jié)正常功能的重要組織結(jié)構(gòu),同時在各種關(guān)節(jié)疾患中也是主要病變部位。骨關(guān)節(jié)炎(OA)以關(guān)節(jié)軟骨退行性變?yōu)樘卣?,其病理改變累及關(guān)節(jié)的各個組成部分,但絕不僅局限于軟骨,還包括軟骨下骨、滑膜、半月板和韌帶。各組成部分的病理改變相互影響,相互作用,共同加速關(guān)節(jié)的退變?;ぜ毎菢?gòu)成滑膜層的大細胞群體,是維持關(guān)節(jié)正常功能的重要組織結(jié)構(gòu),它包埋在顆粒狀無定性的基質(zhì)中,基質(zhì)內(nèi)有分散的纖維分布?;び?span lang="EN-US">A
型(巨噬樣滑膜細胞)、
B型(成纖維樣滑膜細胞)以及
C型(樹突細胞樣滑膜細胞)細胞組成。
方法簡介:
實驗室分離的兔滑膜成纖維細胞采用混合酶消化結(jié)合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測
實驗室分離的兔滑膜成纖維細胞經(jīng)Vimentin熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、、酵母和等。
培養(yǎng)信息:
培養(yǎng)基:含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態(tài):成纖維細胞樣
傳代特性:可傳3代左右
消化液:0.25%胰蛋白酶
培養(yǎng)條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
兔滑膜成纖維細胞體外培養(yǎng)周期有限;建議使用配套的生長培養(yǎng)基及正確的操作方法來培養(yǎng),以此保證該細胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

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原代細胞的分離方法:
一、懸浮細胞的分離方法
組織材料若來自血液、羊水、胸水或腹水的懸液材料,簡單的方法是采用1000r/min的低速離心10分鐘。經(jīng)離心后由于各種細胞的比重不同可在分層液中形成不同層,這樣可根據(jù)需要收獲目的細胞。
二、實體組織材料的分離方法
對于實體組織材料,由于細胞間結(jié)合緊密,為了使組織中的細胞充分分散,形成細胞懸液,可采用機械分散法(物理裂解)和消化分離法。
(一)機械分散法
特點:簡便、快速,但對組織機械損傷大,而且細胞分散效果差,適用于處理纖維成分少的軟組織。
(二)消化分離法
組織消化法是把組織剪切成較小團塊(或糊狀),應(yīng)用酶的生化作用和非酶的化學作用進一步使細胞間的橋連結(jié)構(gòu)松動,使團塊膨松,由塊狀變成絮狀,此時再采用機械法,用吸管吹打分散或電磁攪拌或在搖珠瓶中振蕩,使細胞團塊得以較充分的分散,制成少量細胞群團和大量單個細胞的細胞懸液,接種培養(yǎng)后,細胞容易貼壁生長。
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