商品屬性：
貨號(hào)
規(guī)格
產(chǎn)品名稱
A-PJ1097-100ml
100ml
大腸桿菌蛋白提取液
儲(chǔ)存條件：
大腸桿菌蛋白提取液儲(chǔ)存：置于 4°C 可保存 2 年。
產(chǎn)品介紹：
**的大腸桿菌蛋白提取液采用獨(dú)特的中性裂解 配方，從而*大限度的提高了后續(xù)提取蛋白的活性。使用該 溶液從大腸桿菌中提取蛋白不需要超聲波破碎等復(fù)雜的操 作步驟，溶液置于 4°C 可長(zhǎng)期保存，使用方便。該溶液室溫 30min 可破碎 95％以上的細(xì)胞，裂解后的溶液可直接通過(guò) Ni-NTA 等純化填料進(jìn)行蛋白純化。該溶液既可適用于小量 蛋白表達(dá)檢測(cè)，也適用于大量蛋白的表達(dá)純化試驗(yàn)；既適用 于純化可溶型蛋白，也適用于純化包涵體蛋白。 主要特征 ? 單組分溶液，使用方便 ? 裂解迅速，蛋白不會(huì)變性 ? 適用于小量或大規(guī)模蛋白表達(dá) ? 適用于可溶性蛋白和包涵體純化 應(yīng)用：大腸桿菌的裂解和包涵體純化。
操作方法：
? 可溶型蛋白操作方法（1 ml 菌液為例） 1. 8,000rpm 室溫離心 3min 后，棄上層培養(yǎng)基，留取管底部菌體（盡量棄除掉培養(yǎng)基）。 2. 加入 200 μl（重懸體積不得少于 50 μl）大腸桿菌蛋白提取液重懸菌體，用吸頭吹打至無(wú)可見(jiàn)細(xì)胞團(tuán)塊。 注：為降低溶液粘度，可加入 Benzonase 核酸內(nèi)切酶至 0.25U/μL；加入終濃度為 1 mg/ml 的溶菌酶效果更佳。 3. 置于室溫孵育 30-60min，期間輕彈離心管數(shù)次以加速裂解。 4. ???解完成后 13,000rpm 于 4℃離心 15-20min，將上清轉(zhuǎn)移至新的容器中，溶液可直接進(jìn)行下一步純化或檢測(cè)試驗(yàn)。 ? 包涵體蛋白操作方法 5. 上述步驟 4 中，棄上清，保留沉淀組分，用 200 μl 的大腸桿菌蛋白提取液重懸沉淀。 6. 加入溶菌酶至終濃度 1 KU/ml，混合均勻，室溫孵育 10min。 7. 加入 800 μl 的**水混合均勻。 8. 13,000 rpm 室溫離心 15-20min，棄上清后用 900 μl **水重懸沉淀，然后加入 200 μl 大腸桿菌蛋白提取液，混合均勻。 9. 13,000rpm 室溫離心 15-20min，重復(fù)步驟 8 三至五次。 10. 將沉淀溶解于變性溶液中，進(jìn)行下一步純化或復(fù)性試驗(yàn)。
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