商品屬性：
貨號
規(guī)格
產(chǎn)品名稱
A-PJ1088-2000U
2000U
ssDNA/RNA環(huán)化連接酶
A-PJ1088-20KU
20KU
儲存條件：
ssDNA/RNA環(huán)化連接酶儲存：-20℃可保存 3 年。 產(chǎn)品介紹： ssDNA/RNA CircLigase 為熱穩(wěn)定的 DNA/RNA 連接 酶，不依賴于 ATP，可催化單鏈 DNA 或單鏈 RNA 的分子內(nèi) 環(huán)化。環(huán)化反應(yīng)中，要求催化底物單鏈 DNA/RNA 具有 5’- 磷酸基團(tuán)和 3’-OH 基團(tuán)。對于大于 15nt 的單鏈底物，該酶 都能高效的連接。 活性定義： 65°C 1h 條件下，催化 1pmol 5’-磷酸化的 ssDNA 底物環(huán)化，所需的酶量定義為 1Unit。 反應(yīng)實例： 1. 按以下組分配制反應(yīng)液 CircLigase (100 U/μl) 1 μl 5’磷酸化 ssDNA/RNA 10-100 pmol 10×CircLigase Buffer 2 μl 50mM MnCl2 1 μl ddH2O Up to 20 ul 65°C 孵育 1h 進(jìn)行環(huán)化反應(yīng)。 2. 失活反應(yīng) 反應(yīng)結(jié)束后，可加入終濃度 10mM EDTA 終止反應(yīng)?；虿捎?br /> 加熱方式 85℃ 10min 加熱失活。 使用注意事項： (1) 環(huán)化底物 ssDNA 或 RNA 必須帶有 5’磷酸基團(tuán)，3’端含有 OH。 (2) 環(huán)化體系中的 ATP 濃度高于 20μM 以上時會極大抑制環(huán)化效率，甚至導(dǎo)致環(huán)化失敗。因此建議底物為純化產(chǎn)物。 (3) 由于本酶提高了耐熱性，在 65℃條件下進(jìn)行連接反應(yīng)，測試中 Betain 無益于連接效率提升。 (4) 本酶主要進(jìn)行分子內(nèi)環(huán)化連接，分子間的連接未檢測到。 (5) 本酶對 ssDNA 和 RNA 的環(huán)化效率極高，多數(shù)情況下，90%以上的底物被環(huán)化。未被環(huán)化的 ssDNA 可通過加入 5U的 Exonuclease I，37°C 消化 15min 去除，以獲得高純度的環(huán)化 ssDNA。未環(huán)化的 ssRNA，將稍后給出去除方案。 (6) 本酶可以連接 15nt 以上的核苷酸，更長的產(chǎn)物連接參數(shù)， 將稍后給出測試報告及 protocol。 (7) 對于連接底物量較少的實驗來講，推薦縮小體系，而不是減少酶的用量。在小體系實驗時注意體系的蒸發(fā)，可加入礦物油以防止蒸發(fā)。 公司正在出售的產(chǎn)品：
產(chǎn)品介紹：
ssDNA/RNA CircLigase 為熱穩(wěn)定的 DNA/RNA 連接 酶，不依賴于 ATP，可催化單鏈 DNA 或單鏈 RNA 的分子內(nèi) 環(huán)化。環(huán)化反應(yīng)中，要求催化底物單鏈 DNA/RNA 具有 5’- 磷酸基團(tuán)和 3’-OH 基團(tuán)。對于大于 15nt 的單鏈底物，該酶 都能高效的連接。
活性定義：
65°C 1h 條件下，催化 1pmol 5’-磷酸化的 ssDNA 底物環(huán)化，所需的酶量定義為 1Unit。
反應(yīng)實例：
1. 按以下組分配制反應(yīng)液 CircLigase (100 U/μl) 1 μl 5’磷酸化 ssDNA/RNA 10-100 pmol 10×CircLigase Buffer 2 μl 50mM MnCl2 1 μl ddH2O Up to 20 ul 65°C 孵育 1h 進(jìn)行環(huán)化反應(yīng)。 2. 失活反應(yīng) 反應(yīng)結(jié)束后，可加入終濃度 10mM EDTA 終止反應(yīng)?；虿捎?br /> 加熱方式 85℃ 10min 加熱失活。 使用注意事項： (1) 環(huán)化底物 ssDNA 或 RNA 必須帶有 5’磷酸基團(tuán)，3’端含有 OH。 (2) 環(huán)化體系中的 ATP 濃度高于 20μM 以上時會極大抑制環(huán)化效率，甚至導(dǎo)致環(huán)化失敗。因此建議底物為純化產(chǎn)物。 (3) 由于本酶提高了耐熱性，在 65℃條件下進(jìn)行連接反應(yīng)，測試中 Betain 無益于連接效率提升。 (4) 本酶主要進(jìn)行分子內(nèi)環(huán)化連接，分子間的連接未檢測到。 (5) 本酶對 ssDNA 和 RNA 的環(huán)化效率極高，多數(shù)情況下，90%以上的底物被環(huán)化。未被環(huán)化的 ssDNA 可通過加入 5U的 Exonuclease I，37°C 消化 15min 去除，以獲得高純度的環(huán)化 ssDNA。未環(huán)化的 ssRNA，將稍后給出去除方案。 (6) 本酶可以連接 15nt 以上的核苷酸，更長的產(chǎn)物連接參數(shù)， 將稍后給出測試報告及 protocol。 (7) 對于連接底物量較少的實驗來講，推薦縮小體系，而不是減少酶的用量。在小體系實驗時注意體系的蒸發(fā)，可加入礦物油以防止蒸發(fā)。
公司正在出售的產(chǎn)品：
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