商品屬性：
貨號
規(guī)格
產(chǎn)品名稱
A-PJ1047-20KU
20KU
Golden MLV Reverse Transcriptase（200U/ul）
儲存條件：
Golden MLV Reverse Transcriptase（200U/ul）儲存：-20°C 可保存 3 年。
產(chǎn)品介紹：
Golden MLV Reverse Transcriptase 反轉(zhuǎn)錄 酶是在鼠源病毒反轉(zhuǎn)錄酶基礎(chǔ)上進行定點突變改良而得。該 酶去除了 RNase H 活性中，從而避免反轉(zhuǎn)錄過程中降解 RNA。同時經(jīng)過突變文庫篩選，使得其熱穩(wěn)定性更強，可耐 受 55℃高溫反應(yīng)（*佳活性溫度為 50℃）。相比于低溫條件 下反轉(zhuǎn)錄反應(yīng)，采用高溫反轉(zhuǎn)錄可顯著打開 RNA 二級結(jié)構(gòu)， 從而提高復(fù)雜 RNA 模板的擴增性能、提高反轉(zhuǎn)錄 cDNA 的 長度和產(chǎn)量，從而提高后續(xù)檢測的靈敏度。 單位定義：以 poly(rA)為模板、oligo(dT)為引物，在 37°C條件下，10 分鐘內(nèi)催化 1 nmol 的 dTTP 摻入形成酸不溶性沉淀物所需要的酶量，定義為一個活性單位。 酶儲存液：20mM Tris-HCl,pH7.5, 150mM NaCl, 0.1%Tween20, 2mM DTT, 50%甘油。
操作方法：
1. 按以下組分配制反應(yīng)體系 Golden MLV Reverse Transcriptase 1 μl 10×RT Buffer 2 μl dNTP Mixture (10 mM each) 1 μl Total RNA or Poly(A) RNA 0.1-2 μg 20×Oligo dT(25)&Random Primer * 1 μl RNase Inhibitor (40 U/μl) 0.2 μl RNase Free H2O Up to 20 μl *注：Oligo dT(25) 使用濃度為 20~50 μM, 如使用 Random9隨機引物可使用 125 μM，基因特異性引物可使用 5 μM。 2．在 PCR 儀上按下列條件進行反轉(zhuǎn)錄反應(yīng) 30°C 5 min *37-50°C 15~30 min 85°C 5 min *推薦的反轉(zhuǎn)錄溫度設(shè)置為 50°C，無論是高 GC 或長片段模板，均可獲得綜合性的 cDNA 產(chǎn)量。 3. 反轉(zhuǎn)錄所得的 cDNA 可直接用于 PCR 反應(yīng)或儲存于-20°C。 4. 其它注意事項：該酶可與 Taq DNA 聚合酶組合，用于One-Step RT-PCR，推薦的 RT 溫度為 50°C，RT 時間為5min，酶的參考用量為：終反應(yīng)濃度 0.5-2U/ul。
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