商品屬性:
貨號(hào)
規(guī)格
產(chǎn)品名稱
A-Hc2232-500U×10
500U×10
T4 DNA Ligase
產(chǎn)品介紹:
T4 DNA Ligase可催化相鄰 DNA 鏈的 5’-P 末端和3’-OH 末端以磷酸二酯鍵結(jié)合的反應(yīng),需 ATP 作輔酶,不僅可以催化粘性末端之間或平滑末端之間的 DNA 的連接,也可以催化 DNA 與 RNA 之間以及少數(shù) RNA 之間的連接???br /> 應(yīng)用于在粘性末端或平末端連接雙鏈 DNA 分子,也可應(yīng)用于修補(bǔ)雙鏈 DNA、RNA 或 DNA RNA 雜交體上的缺口。
活性定義:
16°C 反應(yīng) 30 分鐘條件下,使 1pmol 的粘性末端 DNA 連接所需要的酶量定義為 1Unit。 失活:65°C,10 分鐘。 10×T4 Ligase Buffer:500 mM Tris-HCl, pH 7.5, 50 mM MgCl2, 25mM DTT, 5mM ATP.
操作方法:
1. 按以下組分配制反應(yīng)體系 10×T4 Ligase Buffer 2 μl 載體 50 ng(0.2-1pmol) 插入片段 1-50 ng(0.2-10pmol) T4 DNA Ligase(200 U/μl) 1 μl ddH2O Up to 20 μl 注意:兩個(gè)片段的連接時(shí),通常載體與插入片段的摩爾比為 1:3(但該比例并非**嚴(yán)謹(jǐn),在 1:1-1:10 范圍內(nèi)均可獲得理想的實(shí)驗(yàn)結(jié)果),提取根據(jù)片段大小與濃度,計(jì)算其摩爾濃度。 2. 如為粘末端連接反應(yīng), 22°C (16-37°C)連接 30min, 連接產(chǎn)物直接用于轉(zhuǎn)化(或凍存于-20°C)。
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