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產(chǎn)品名稱
A-Hc2209-20 次
20 次
pBM30 Toposmart Cloning Kit（TOPO克隆載體 原核表達(dá)）
儲存條件：
pBM30 Toposmart Cloning Kit（TOPO克隆載體 原核表達(dá)）保存條件：-20℃保存
產(chǎn)品介紹：
利用痘苗病毒的拓?fù)洚悩?gòu)酶I(Topoisomerase I)的切割再連接的特點將PCR產(chǎn)物定向克隆到線性化的pBM30原核表達(dá)載體中。適用于克隆由Pfu、KOD、Xerox、Phusion和Q5等高保真DNA聚合酶擴(kuò)增的平末端PCR產(chǎn)物。引物T7和T7t可用于菌落PCR和測序鑒定。
產(chǎn)品特點：
（1） 連接反應(yīng)僅需 5 分鐘 （2） 只適合平末端PCR 產(chǎn)物的快速、高效、定向克隆。 （3） 載體采用了新的制備工藝，零背景，無需藍(lán)白斑篩選。 （4） 具有T7 啟動子，類似于 pET30 載體，具備原核表達(dá)所需的所有調(diào)控元件。適用于外源基因在大腸桿菌中的高水平表達(dá)。 （5） 帶 His.tag 和 S.tag 兩種純化標(biāo)簽。 （6） 具有凝血酶和腸激酶兩種蛋白酶酶切識別序列。 （7） 載體具有卡那霉素抗性。
注意事項：
（1） 引物要求：PCR 引物 5’端不能進(jìn)行磷酸化修飾，普通商業(yè)化引物即可。上游引物的 5’端添加 CACC 四個堿基。如果表達(dá)蛋白需 C 端帶 6His 標(biāo)簽，下游引物則需要去掉基因本身的終止密碼子（3 個堿基）。目的蛋白的翻譯終止由 6His 標(biāo)簽的終止密碼子TGA 來實現(xiàn)。 （2） DNA 聚合酶：選用 Pfu、sPfu、Phusion、Q5、KOD 和 Xerox 等高保真 DNA 聚合酶用于 PCR 擴(kuò)增。 （3） 連接時間：5-15 分鐘，一般為 15 分鐘。
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