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產(chǎn)品名稱
A-Hc2024-100次
100次
PCR產(chǎn)物純化回收試劑盒
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儲存條件：
PCR產(chǎn)物純化回收試劑盒保存條件：本試劑盒在室溫儲存 12 個(gè)月不影響使用效果。
產(chǎn)品介紹：
在高離序鹽存在的情況下，DNA 片斷選擇性的吸附于離心柱內(nèi)的硅基質(zhì)膜上，再通過一系列快速的漂洗－離心的步驟，去蛋白液和漂洗液將引物、核苷酸、蛋白、酶等雜質(zhì)去除，*后低鹽、高 pH 值的洗脫緩沖液將純凈 DNA 從硅基質(zhì)膜上洗脫。
產(chǎn)???特點(diǎn)： 1.離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口特制吸附膜，柱與柱之間吸附量差異極小，可重復(fù)性好。克服了國產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。 2.使用了上等結(jié)合液，不含傳統(tǒng)結(jié)合液的碘化鈉和高氯酸鹽，不抑制回收后酶切、連接克隆等下游反應(yīng)。 3.結(jié)合液調(diào)制成為了黃顏色，便于監(jiān)測 pH 值變化從而達(dá)到*佳結(jié)合效果，大大提高回收效率。 4.簡單快速、使用方便。
注意事項(xiàng)：
1.所有的溶液應(yīng)該是澄清的，如果環(huán)境溫度低時(shí)溶液可能形成沉淀，此時(shí)不應(yīng)該直接使用，可在 37℃水浴加熱幾分鐘，即可恢復(fù)澄清,使用前應(yīng)該恢復(fù)到室溫. 2.儲存于低溫（4℃或者-20℃）會造成溶液沉淀，影響使用效果。
3.避免試劑長時(shí)間暴露于空氣中產(chǎn)生揮發(fā)、氧化、pH 值變化，各溶液使用后應(yīng)及時(shí)蓋緊蓋子。 4.結(jié)合液中含有刺激性化合物，操作時(shí)要戴乳膠手套，避免沾染皮膚，眼睛和衣服。若沾染皮膚、眼睛時(shí)，要立即用大量清水或者生理鹽水沖洗。 5.回收純化的 DNA 片段一般在 100bp 到 40kb 之間，過長、過短片段的回收效率迅速降低。 6.回收 DNA 的量和起始 DNA 的量，洗脫體積，DNA 片斷大小有關(guān)。一般 1-20μg，100bp-5kb 的 DNA 片段，回收率可達(dá) 95%。 7.pH 值≤7.5 時(shí)，吸附膜吸附 DNA 的效率*高。如果待純化產(chǎn)物含有堿性物質(zhì)過多，造成和結(jié)合液混和后pH 偏高，會導(dǎo)致回收率降低?；旌秃?，如果結(jié)合液依舊保持黃色，說明 pH 正常；如果變成橘紅色或者淡紫色，說明 pH 偏高，可加 5-10μl 3M 醋酸鈉（pH5.2）將 pH 值調(diào)到 5-7（黃色）。 8.洗脫液 EB 不含有螯合劑 EDTA，不影響下游酶切、連接等反應(yīng)。也可以使用水洗脫，但應(yīng)該確保 pH 大于 7.5pH 過低影響洗脫效率。用水洗脫，DNA 片段應(yīng)該保存在-20℃。DNA 片段如果需要長期保存，可以用 TE 緩沖液洗脫（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是 EDTA 可能影響下游酶切反應(yīng)，使用時(shí)可以適當(dāng)稀釋。 自備試劑：無水乙醇
操作步驟：
提示：**次使用前請先在漂洗液 WB 中加入指定量無水乙醇，加入后請及時(shí)打鉤標(biāo)記已加入乙醇，以免多次加入! 1.每 100μl PCR 擴(kuò)增后體系或者酶切后體系加入 500μl 結(jié)合液 BB，充分混勻。（如果初始體系小于 100μl，請事先用雙蒸水調(diào)整至 100μl）。 2.將上一步所得溶液加入吸附柱 EC 中（吸附柱放入收集管中），室溫放置 1min，12,000rpm 離心 30-60sec，倒掉收集管中的廢液。 3.加入 500μl 漂洗液 WB（請先檢查是否已加入無水乙醇 !），12,000rpm 離心30sec，棄掉廢液。 4.重復(fù)操作步驟 3。 5.將吸附柱 EC 放回空收集管中，12,000rpm 離心 2min，盡量除去漂洗液， 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。 6.取出吸附柱 EC，放入一個(gè)干凈的離心管中，室溫放置數(shù)分鐘。 7.在吸附膜的中間部位滴加洗脫緩沖液EB（洗脫緩沖液事先在 65-70℃水浴中加熱 效果更好），室溫放置 2min，12,000rpm 離心 1min。如果需要較多量 DNA，可將得到的溶液重新加入吸附柱中，離心 1min。(注意:洗脫體積越大，洗脫效率越高。 如果需要 DNA 濃度較高，可以適當(dāng)減少洗脫體積， 但是*小體積不應(yīng)少于 30μl， 體積過小降 DNA 洗脫效率，減少產(chǎn)量。)
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