產品名稱：人β,1-3-半乳糖苷酶基因熒光PCR檢測試劑盒
產品貨號:FS-01P99960
操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

產品特點：

1、公司產品僅用于科研不需要單獨純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

產品組成:

使用方法:

一:培養(yǎng)細胞預處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養(yǎng)細胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細胞兩次,離心得到的細胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細胞預處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細胞兩次,得到的白細胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取

5.在細胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現(xiàn)沉淀漂浮是正常現(xiàn)象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發(fā)。

13. 重復上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結合DNA能力較強,如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機械斷裂,電泳時DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷的產品：
FLG(filaggrin)peptide 絲聚蛋白/中間絲蛋白抗原Multi-class aibodies： 0.5mg

溴脫氧尿單克隆抗體 Ai-BrdU 0.1ml

Rhesus aibody Rh phospho-DOK1(Tyr362) 磷suan化D酪氨suan激mei衰減蛋白1抗體  0.1ml

PVDF膜(30cm×3m 0.45um) 1卷 Pall-Gelman

ZNF420 英文名稱： 鋅指蛋白420抗體 0.2ml

DBPA 英文名稱： 冷休克蛋白DBPA抗體 0.2ml

溴脫氧尿單克隆抗體 Ai-BrdU 0.1ml

GLP-1/KG-31(Glucagon-like peptide-1) peptide 胰高血糖su樣肽-1(多肽)Multi-class aibodies： 0.5mg

IGF1R IGF1R / CD221 兔單抗 (PE) Human

Rhesus aibody Rh phospho-Cyclin E(Thr395) 磷suan化周期suE抗體  0.1ml

品名  備注

ZWI 英文名稱： 著絲粒ZW10相互作用蛋白1抗體 0.2ml

DRG1 英文名稱： GTP發(fā)育調控結合蛋白1抗體 0.2ml

IGF1R IGF1R / CD221 兔單抗 (PE) Human

ZBTB2 英文名稱： 鋅指蛋白437抗體 0.2ml

DNER 英文名稱： 腦表皮生長因子跨膜蛋白DNER抗體 0.1ml

血管緊張suI抗體 Ai-Ang I/AT1 0.1ml

Ai-factor VIII/PE 熒光suPE標記第八因子相關抗原抗體IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

Rhesus aibody Rh phospho-eIF4E(Ser209) 磷suan化真核翻譯起始因子4E抗體  0.1ml

Egr-1(Early growth response 1) 早期反應基因-1/應急反應生長基因1抗原Multi-class aibodies： 0.5mg
人β,1-3-半乳糖苷酶基因熒光PCR檢測試劑盒1,3-二甲基-5-吡唑tong滴滴涕(4.4-DDT) 標準品  CAS號：50-29-3 100MG通用型總脂蛋白膽固（Total L-Cholesterol）mei連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒

氟啶（標準品）滴滴涕及其代謝物 套裝 1ml總脂蛋白膽固（Total L-Cholesterol）mei連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒

氟節(jié)（標準品）溴菊酯,溴菊酯 標準品  CAS號：52918-63-5 250MG組織總脂蛋白膽固（Total L-Cholesterol）mei連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒

氯吡脲（標準品）溴菊酯,溴菊酯標準品  CAS號： 52918-63-5 100MG體液總脂蛋白膽固（Total L-Cholesterol）mei連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒

氯氟吡氧乙suan（標準品）甲基 標準品  CAS號：919-86-8 50MG培養(yǎng)液總脂蛋白膽固（Total L-Cholesterol）mei連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測試劑盒

麥穗寧（標準品）甜菜安 標準品  CAS號：13684-56-5 250MG血液鋰（lithium）化學比色法定量檢測試劑盒

標準溶液（100μg/m,u=6～2%,tong） 標準品  CAS號：.50-2-2 250MG組織鋰（lithium）化學比色法定量檢測試劑盒

氟戊菊酯標準溶液（1.00mg/ml,基體:甲）丁嘧脲 標準品  CAS號：80060-09-9 250MG土壤鋰（lithium）化學比色法定量檢測試劑盒