產品名稱：凋亡抑制蛋白Livin基因熒光PCR檢測試劑盒
產品貨號:FS-01P99903
操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

產品特點：

1、公司產品僅用于科研不需要單獨純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

產品組成:

使用方法:

一:培養(yǎng)細胞預處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養(yǎng)細胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細胞兩次,離心得到的細胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細胞預處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細胞兩次,得到的白細胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取

5.在細胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現(xiàn)沉淀漂浮是正常現(xiàn)象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發(fā)。

13. 重復上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結合DNA能力較強,如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機械斷裂,電泳時DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷的產品：
Ai-phospho-c-Raf (Ser338) /FITC 熒光su標記磷suan化原癌基因c-Raf抗體IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

Rabbit Ai-Bovine IgG 兔抗IgG (親和層析純化)Multi-class aibodies： 1mg

GDNF家族受體α-1抗體 Ai-GFRα-1/GDNF 0.1ml

Rabbit Ai-chicken IgG/HRP 辣根過氧化物mei標記的兔抗雞IgG 0.1ml

FAR2 英文名稱： 脂肪酰A還原mei2抗體 0.2ml

Rhesus aibody Rh Phospho-Smad1(Ser206) 磷suan化細胞信號轉導分子Smad-1抗體  0.1ml

Rabbit Ai-Bovine IgG 兔抗IgG (親和層析純化)Multi-class aibodies： 1mg

PHD3 (Egln3; HIF-prolyl hydroxylase 3) 脯氨suan羥化mei(多肽)Multi-class aibodies： 0.5mg

Ai-B7-DC/CD273 程序性死亡配體2抗體Multi-class aibodies： 0.1ml

Rhesus aibody Rh phospho-ADRB2(Ser346) 磷suan化腎上腺su能受體β2抗體  0.1ml

Mast Cell Tryptase 濃縮液 0.1ml 進口分裝

USE1 英文名稱： 囊泡轉運蛋白Use1抗體 0.2ml

CHODL 英文名稱： 軟骨凝集蛋白CHODL抗體 0.1ml

Ai-B7-DC/CD273 程序性死亡配體2抗體Multi-class aibodies： 0.1ml

SKP1 英文名稱： S期激mei相關蛋白1抗體 0.2ml

alpha Elastin 英文名稱： α彈性蛋白抗體 0.1ml

轉移生長因子–β受體1抗體 Ai-TGF-βR1/ALK 0.1ml

Ai-TM/FITC 熒光su標記血栓調節(jié)蛋白抗體IgGMulti-class aibodies： 0.2ml

Rhesus aibody Rh Phospho-LAT (Tyr191) 磷suan化T細胞活化連接蛋白抗體  0.1ml

OPN 骨橋蛋白(多肽抗原)Multi-class aibodies： 0.5mg
凋亡抑制蛋白Livin基因熒光PCR檢測試劑盒乙?；阴１?/span>(>99%,BR)五味子酯甲CY5蛋白標記試劑盒

溴化乙酰(>98%,BR)五味子乙SULFORHODAMINE蛋白標記試劑盒

tong肟(>98%,BR)煙?？贵w/蛋白HRP標記制備試劑盒

化乙酰(>98%,BR)西紅花抗體/蛋白AP標記制備試劑盒

suan性藍29(>50%，Ind Grade)西紅花I抗體/蛋白生物su標記制備試劑盒

suan性藍40(>50%,BS)西紅花II抗體蛋白質A標記制備試劑盒

suan性品紅6B(>50%,BS)桑色su病HRP標記制備試劑盒

吖啶鹽suan鹽(>98%，BS)D-(-)-奎寧suan蛋白電泳2倍樣品處理液