產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、公司產(chǎn)品僅用于科研不需要單獨(dú)純化線粒體，柱式法純化，操作簡(jiǎn)單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個(gè)動(dòng)物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產(chǎn)品只適合于動(dòng)物材料，不適合于植物材料，因?yàn)橹参锞€粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

產(chǎn)品組成:

下列是公司正熱銷的產(chǎn)品：

細(xì)胞總脂蛋白膽固醇（Total L-Cholesterol）酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試劑盒20次Schaedler Anaerobic Broth /Schaedler 厭氧肉湯氟鋁酸鈉

組織總脂蛋白膽固醇（Total L-Cholesterol）酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試劑盒20次W.L.營(yíng)養(yǎng)肉湯 (CM0501)人胰島素樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白2（IGFBP2）ELISA試劑盒,

體液總脂蛋白膽固醇（Total L-Cholesterol）酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試劑盒20次紫色麥康凱肉湯 (麥康凱肉湯 (US 配方)) (CM0005a)人抗心磷脂抗體IgM（ACA-IgM）ELISA試劑盒,ACA-IgM ELISA

細(xì)胞培養(yǎng)液總脂蛋白膽固醇（Total L-Cholesterol）酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試劑盒20次紫色麥康凱肉湯 (US 配方) (CM0006a)人孕/孕酮（PROG）ELISA試劑盒,PROG ELISA

血液鋰（lithium）化學(xué)比色法定量檢測(cè)試劑盒50次無(wú)鹽麥康凱瓊脂 (CM0007b)人二氫嘧啶酶樣3（DPYSL3）ELISA試劑盒,DPYSL3 ELISA

組織鋰（lithium）化學(xué)比色法定量檢測(cè)試劑盒50次緩沖蛋白胨水 (CM0509)人磷酯酶Cγ鏈（PLCγ1）ELISA試劑盒, PLCγ1 ELISA

土壤鋰（lithium）化學(xué)比色法定量檢測(cè)試劑盒50次卡里-布萊爾轉(zhuǎn)運(yùn)培養(yǎng)基 (CM0519)人酪氨酸激酶2（Tyk-2）ELISA試劑盒, Tyk-2 ELISA

血液鋰（lithium）酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)比色法定量檢測(cè)試劑盒20次Giolitti-Cantoni 肉湯 (CM0523)人胰淀粉酶（PAMY）ELISA試劑盒,

組織鋰（lithium）酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)比色法定量檢測(cè)試劑盒20次SS 改良瓊脂(CM0533)人超氧化物歧化酶（SOD）ELISA試劑盒,

土壤鋰（lithium）酶連續(xù)循環(huán)反應(yīng)比色法定量檢測(cè)試劑盒20次Dermasel 瓊脂 (CM0539)人血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子（VWF）ELISA試劑盒,

通用型N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次沙保氏麥芽糖瓊脂 (CM0041a)人轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白（TTR）ELISA試劑盒,

細(xì)胞N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次產(chǎn)氣莢膜菌瓊脂基礎(chǔ) (OPSP) (CM0543)人NOD樣受體（NLR）ELISA試劑盒,

組織N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次土霉素葡萄糖酵母提取物選擇性培養(yǎng)基(OGYE培養(yǎng)基) (CM0545)人肽（Att）ELISA試劑盒,

血液N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次虎紅氯霉素瓊脂基礎(chǔ) (CM0549)豚鼠血清總補(bǔ)體（CH50）ELISA試劑盒,

體液N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）活性比色法定量檢測(cè)試劑盒20次假單胞菌瓊脂基礎(chǔ) (CM0559)兔氧化低密度脂蛋白抗體（OLAb）ELISA試劑盒,
心病毒(SAFV)檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)Human Thrombin activatable fibrinolysis inhibitor,TAFI ELISA Kit  人纖溶抑制因子/凝血酶激活的纖溶抑制物L(fēng)-胱氨酸 99%

Human plaet membrane glycoprotein II b III a,GP- II b III a ELISA Kit  人血小板膜糖蛋白ⅡbⅢaL-半胱氨酸鹽酸鹽，一水 99%

Human thrombospondin 1,TSP-1 ELISA Kit  人血小板反應(yīng)蛋白/凝血酶敏感蛋白1L-谷氨酸 99%

Human alpha-granular membrane protein,GMP-140 ELISA Kit  人血漿α顆粒膜蛋白L-組氨酸鹽酸鹽，一水 99%

Human terminal complement complex C5b-9,TCC C5b-9 ELISA Kit  人末端補(bǔ)體復(fù)合物C5b-9L-組氨酸 99%

Human Complement 4,C4 ELISA Kit   人補(bǔ)體蛋白4L-異亮氨酸 99%

Human Complement 3,C3 ELISA Kit  人補(bǔ)體蛋白3L-亮氨酸 99%

Human coagulation factor II ,F II ELISA Kit  人凝血因子ⅡL-賴氨酸鹽酸鹽 99%

使用方法:

一:培養(yǎng)細(xì)胞預(yù)處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細(xì)胞兩次,離心得到的細(xì)胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細(xì)胞預(yù)處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動(dòng)物組織剪碎(芝麻大小*),轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動(dòng)物組織,因?yàn)閮瞿^(guò)程中形成的冰晶會(huì)將線粒體刺破,使其DNA釋放出來(lái)被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預(yù)處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細(xì)胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細(xì)胞兩次,得到的白細(xì)胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動(dòng)物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級(jí))四:mtDNA提取

5.在細(xì)胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復(fù)顛倒混勻10次。千萬(wàn)不要?jiǎng)×艺袷帯?/span>

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過(guò)8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見(jiàn)白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時(shí)的溶液比重較大,有時(shí)候出現(xiàn)沉淀漂浮是正?，F(xiàn)象,取上清時(shí)避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結(jié)合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會(huì)揮發(fā)。

13. 重復(fù)上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會(huì)影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時(shí)不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個(gè)新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預(yù)熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結(jié)合DNA能力較強(qiáng),如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當(dāng)于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來(lái)洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個(gè)動(dòng)物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機(jī)械斷裂,電泳時(shí)DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。

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