操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿(mǎn)洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、公司產(chǎn)品僅用于科研不需要單獨(dú)純化線(xiàn)粒體，柱式法純化，操作簡(jiǎn)單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個(gè)動(dòng)物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產(chǎn)品只適合于動(dòng)物材料，不適合于植物材料，因?yàn)橹参锞€(xiàn)粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

產(chǎn)品組成:

使用方法:

一:培養(yǎng)細(xì)胞預(yù)處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細(xì)胞兩次,離心得到的細(xì)胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細(xì)胞預(yù)處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動(dòng)物組織剪碎(芝麻大小*),轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動(dòng)物組織,因?yàn)閮瞿^(guò)程中形成的冰晶會(huì)將線(xiàn)粒體刺破,使其DNA釋放出來(lái)被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預(yù)處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細(xì)胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細(xì)胞兩次,得到的白細(xì)胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動(dòng)物線(xiàn)粒體DNA提取試劑盒(PCR級(jí))四:mtDNA提取

5.在細(xì)胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復(fù)顛倒混勻10次。千萬(wàn)不要?jiǎng)×艺袷帯?/span>

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過(guò)8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見(jiàn)白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時(shí)的溶液比重較大,有時(shí)候出現(xiàn)沉淀漂浮是正?，F(xiàn)象,取上清時(shí)避開(kāi)漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結(jié)合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會(huì)揮發(fā)。

13. 重復(fù)上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會(huì)影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時(shí)不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個(gè)新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預(yù)熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結(jié)合DNA能力較強(qiáng),如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當(dāng)于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來(lái)洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線(xiàn)粒體DNA。每107個(gè)動(dòng)物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機(jī)械斷裂,電泳時(shí)DNA可能不呈現(xiàn)專(zhuān)一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷(xiāo)的產(chǎn)品：
IL-12 P35（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Salmosyst broth base Salmosyst 肉湯基礎(chǔ)Oxford Agar Base（SN標(biāo)準(zhǔn)）

IL-12 P40（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Salmosyst selective supplement tablets Salmosyst選擇添加片黨參炔苷 Lobetyolin

IL-13（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Selective agar for pathogenic fungi致病選擇瓊脂2-deacetyl wilformine 2-deacetyl wilformine

IL-14（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Selenite cystine enrichment btoth for microbiology2′-脫氧胸苷-5′-三磷酸三鈉鹽

IL-15（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克SIM medium SIM培養(yǎng)基羧甲基瓊脂糖凝膠CL-6B

IL-16（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克SIMMONS citrate agar simmons檸檬酸鹽瓊脂癸酸

IL-17（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Sodium-chloride peptone broth(buffered) 蛋白胨肉湯（緩沖）人肝癌抗原（PHC）ELISA試劑盒,PHC ELISA kit

IL-18（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Sorbitol-MacCONKEY agar(SMAC agar)SMAC瓊脂/山梨麥康凱瓊脂人癌基因蛋白質(zhì)p190/bcr-abl ELISA試劑盒,

IL-19（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克SPS agar ANGELOTTI perfringens selective agar SPS瓊脂/ANGELOTTI人抗網(wǎng)硬蛋白抗體（ARA）ELISA試劑盒, RA ELISA kit

ERK 1（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克產(chǎn)氣莢膜菌選擇瓊脂梭人S100鈣結(jié)合蛋白A8/鈣粒蛋白A（S100A8）ELISA試劑盒,S100A8 ELISA K

ERK 2（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克SS agar Salmonella-Shigella agar SS瓊脂/沙門(mén)氏菌-志賀氏菌瓊脂人乙型肝炎表面抗原（HBsAg）ELISA試劑盒,HBsAg ELISA

ERK 3（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克SSDC agar(Salmonella-Shigella agar with sodium dexoycholate and calcium chloride) SSDC 瓊脂/沙門(mén)氏菌-志賀氏菌瓊脂（含脫氧膽鹽氯化鈣）人抗甲型肝炎病IgG抗體（anti-HAV）ELISA試劑盒, anti-HAV ELISA

ERK 5（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Standard count agar標(biāo)準(zhǔn)計(jì)數(shù)瓊脂人軍團(tuán)菌抗體IgA（LP Ab-IgA）ELISA試劑盒,LP Ab-IgA ELISA

ERK 6（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Standard nutrient agar標(biāo)準(zhǔn)I營(yíng)養(yǎng)瓊脂人單純皰疹?、蛐涂贵w（HSVⅡ-Ab）ELISA試劑盒,HSVⅡ-Ab ELISA

GSK-3 Alpha（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Standard nutrient broth 標(biāo)準(zhǔn)I營(yíng)養(yǎng)瓊脂人D-乳酸脫氫酶（D-LDH） ELISA試劑盒,
普氏立克次體（RP）檢測(cè)試劑盒（熒光-PCR法）UGT2B4(Human uridine dipho-sphate glucuronosyltransferase 2 family polypeptide B4) ELISA Kit  人二磷酸尿核苷葡糖酸基轉(zhuǎn)移酶2家族肽B4氫化 98%

PPP1R1A(Human protein phosphatase 1 regulatory subunit A) ELISA Kit  人蛋白磷酸酶1調(diào)控/抑制因子亞基1A氫化鈉 98%

ABCG2(Human ATP-binding cassette transporter G2) ELISA Kit  人腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體G2吐溫80 CP

GDI(Human Guanine nucleotide dissociation Inhibitor) ELISA Kit  人鳥(niǎo)苷酸解離抑制因子吐溫80 藥用級(jí)

OTF2B(Human octamer transcription factor 2B) ELISA Kit  人八聚體轉(zhuǎn)錄因子金屬鎵 SP

OTF2A(Human octamer transcription factor 2A) ELISA Kit  人八聚體轉(zhuǎn)錄因子金屬鎵 99.999% metals basis

DUTP(Human deoxyuridinetriphate) ELISA Kit  人脫氧尿三磷酸金屬鎵 99.9999% metals basis

CMR(Human costimulatory molecules recptor) ELISA Kit  人協(xié)同激分子受體金屬鎵 99.99999% metals basis

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