產(chǎn)品特點：
1、公司產(chǎn)品僅用于科研不需要單獨純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。
2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。
3、每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。
注意：本產(chǎn)品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。
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產(chǎn)品名稱
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恙蟲病東方體（OT）檢測試劑盒（熒光-PCR法）
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規(guī)格
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50T
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貨號
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FS-01P99733
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操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
產(chǎn)品組成:
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成分
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規(guī)格
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溶液A
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13ml
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溶液B
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13ml
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溶液C
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18ml
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離心吸附柱
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50套
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通用洗柱液
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50ml
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DNA洗脫液
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10ml
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說明書
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1份
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下列是公司正熱銷的產(chǎn)品：
Insulin R-alpha（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Pseudomonas CN Selective supplement人艾杜糖硫酸酯酶（IDS）ELISA試劑盒,
FSH-beta（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Pseudomonas Selective Agar人遲現(xiàn)抗原4（VLA4）ELISA試劑盒,
TSH－beta（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克R2A agar R2A瓊脂人素（CTX）ELISA試劑盒,
IL-1 alpha（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克IST Rambach agar Rambach瓊脂人水蛭素（HRD）ELISA試劑盒,
IL-1 beta（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Rogosa agar Lactobacillus selective agar Rogosa瓊脂/乳酸菌選擇瓊脂小鼠胰島素樣生長因子結合蛋白6（IGFBP-6）ELISA試劑盒,
IL-2（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Ropse-Bengal Chloramphenicol Agar羅斯-孟加拉氯霉素瓊脂小鼠骨成型蛋白2（BMP-2）ELISA試劑盒,
IL-3（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克SABOURUD 2％ dextrose agar沙氏 2％右旋糖瓊脂小鼠雌二醇（E2）ELISA試劑盒,
IL-4（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克SABOURUD 4％ glucose agar 沙氏 4％葡萄糖瓊脂小鼠Ⅰ型膠原（Col Ⅰ） ELISA試劑盒,
IL-5（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克SABOURUD 2％ dextrose broth 沙氏 2％右旋糖肉湯大鼠磷酸化乙酰輔酶A羧化酶（pACCase）ELISA試劑盒,
IL-6（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克SABOURUD-1％ dextrose-1％maltoseagar 沙氏1％右旋糖1％麥芽糖瓊脂大鼠β淀粉樣蛋白1-42（Aβ1-42）ELISA試劑盒,
IL-7（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克SABOURUD 4％ maltose agar 4％麥芽糖瓊脂大鼠胰島素受體β（ISR-β）ELISA試劑盒,
IL-8（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Salmonella agar acc.to ONOZ 沙門氏菌瓊脂大鼠抗內(nèi)膜抗體（EMAb）ELISA試劑盒,
IL-9（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Salmonella enrichment broth acc.to RAPPAPORT 沙門氏菌富集肉湯大鼠低密度脂蛋白復合物（LDL-IC）ELISA試劑盒,
IL-10（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Salmonella enrichment broth acc.to RAPPAPORT-VASSILIADIS( RVS)大鼠白介素10（IL-10）ELISA試劑盒,
IL-11（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克沙門氏菌富集肉湯O/F培養(yǎng)基（HLGB）
恙蟲病東方體（OT）檢測試劑盒（熒光-PCR法）human similar to cDNA sequence BC027382 ELISA Kit 人類似cDNA順序BC027382氫化鈉 80%
human similar to RIKEN cDNA 4931408D14 gene ELISA kit 人類似RIKEN cDNA 4931408D14 基因對氯甲苯 AR,98.0%
RCOR3(Human REST corepressor 3) ELISA Kit 人REST協(xié)阻抑因子3鄰氯甲苯 AR,98%
COLEC11(Human collectin sub-family member 11) ELISA Kit 人集蛋白亞家族成員11反二酸 CP，99.0%
Alpha1 Beta-GP(Human Alpha1 Beta glycoprotein) ELISA Kit 人α1β糖蛋白順二酸酐 AR，99.5%
sTREM-1(Human soluble Triggering Receptor Expresses on Myeloid Cells-1) ELISA Kit 人可溶性髓系觸發(fā)受體-1二烷 96%
MSTN(Human Myostatin) ELISA Kit 人肌抑素二烷 10%的水溶液
MLZE(Human melanomaderived leucine zipper extra-nuclear factor) ELISA Kit 人黑素瘤衍生亮氨酸拉鏈額外核因子氫化 97%
使用方法:
一:培養(yǎng)細胞預處理
1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養(yǎng)細胞,離心收集后棄上清。
2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細胞兩次,離心得到的細胞沉淀直接用于mtDNA提取。
二:組織細胞預處理
3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。
三:血液預處理
4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細胞層。
5. 用自備PBS洗滌白細胞兩次,得到的白細胞沉淀用于mtDNA提取。
柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取
5.在細胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。
6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。
7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。
8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。
9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現(xiàn)沉淀漂浮是正常現(xiàn)象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。
10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結合,此步十分重要。
11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。
12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。
注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發(fā)。
13. 重復上步1次。
14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。
15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。
16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。
17. 由于本公司離心吸附柱結合DNA能力較強,如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。
18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。
19. 由于DNA機械斷裂,電泳時DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。
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