產(chǎn)品特點：

1、公司產(chǎn)品僅用于科研不需要單獨(dú)純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個動物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產(chǎn)品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

產(chǎn)品組成:

使用方法:

一:培養(yǎng)細(xì)胞預(yù)處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養(yǎng)細(xì)胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細(xì)胞兩次,離心得到的細(xì)胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細(xì)胞預(yù)處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預(yù)處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細(xì)胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細(xì)胞兩次,得到的白細(xì)胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取

5.在細(xì)胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復(fù)顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現(xiàn)沉淀漂浮是正?，F(xiàn)象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結(jié)合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發(fā)。

13. 重復(fù)上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預(yù)熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結(jié)合DNA能力較強(qiáng),如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當(dāng)于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機(jī)械斷裂,電泳時DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷的產(chǎn)品：
BAD（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克MR-VP broth Methylred-VOGES-PROSKAUER broth MR-VP肉湯/甲基紅 VOGES-PROSKAUER肉湯人受體酪氨酸激酶（RTKs）ELISA試劑盒,

BAX（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克MSRV selective supplement MSRV 選擇添加劑人甲狀腺球蛋白（TG）ELISA試劑盒,

BCL2（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克MSRV medium( base) modified MSRV改性培養(yǎng)基（基礎(chǔ)）人受磷蛋白（PLN）ELISA試劑盒,

Caspase 1 （抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克MUELLER-HINTON agar MUELLER-HINTON 瓊脂小鼠嗜酸粒趨化蛋白Eotaxin 1（Eotaxin 1/CCL11）ELISA試劑盒,

Caspase-2-G（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克MUELLER-HINTON agar .to NCCLS MUELLER-HINTON瓊脂大鼠凋亡相關(guān)因子（FAS/CD95）ELISA試劑盒,

Caspase-3（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克MUELLER-HINTON broth MUELLER-HINTON 肉湯大鼠β素（BTC）ELISA試劑盒,

Caspase-4 p20（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Nutrient agar營養(yǎng)瓊脂大鼠雌三醇（E3）ELISA試劑盒,

Caspase 6（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Nutrient broth 營養(yǎng)瓊脂雞神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白（GFAP）ELISA試劑盒,

Caspase-7（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克OF basal medium acc.to HUGH and LEIFSON OF基礎(chǔ)肉湯兔子補(bǔ)體片斷3a（C3a）ELISA試劑盒,

Caspase-8（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克OGYE Agar Oxytetracycline-Glucose-Yeast Ectract Agar Base賴 氨酸脫羧酶肉湯

Caspase-9（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克OGYE瓊脂/土霉素葡萄糖酵母瓊脂L-天門冬氨酸鉀

Caspase 10（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克OGYE 選擇添加劑BOC-L-脯氨酸

MYC（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Orange serum agar橙血清瓊脂L-甲狀腺素

TNF alpha（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Oxford Listeria selective agar( base) 牛津李斯特氏菌選擇瓊脂（基礎(chǔ)）二氫楊梅素 Dihydromyricetin

TNF beta（抗人；抗兔；抗小鼠；抗大鼠）100微克Oxford Listeria selective supplement 牛津李斯特氏菌選擇添加劑T4 DNA聚合酶
猩紅熱鏈球菌（SS）檢測試劑盒（熒光-PCR法）Human similar to RIKEN cDNA 3110050K21 gene ELISA Kit  人類似RIKEN cDNA 3110050K21 基因硝酸銣 99.9% metals basis

Human similar to RIKEN cDNA 2610307008 gene ELISA Kit  人類似RIKEN cDNA 2610307008 基因氯化銣 SP

human similar to RIKEN cDNA 2010109K09 gene ELISA KIT  人類似RIKEN cDNA 2010109K09 基因氯化銣 99.95% metals basis

RHOB(Human ras homolog gene family,memmber B) ELISA Kit  人ras同源物基因家族成員b氯化銣 AR,99.5%

Human hypothetical protein LOC677340 ELISA Kit  人假定蛋白LOC677340碳酸銣 99.8% metals basis

Human hypothetical protein LOC433328 ELISA Kit  人假定蛋白LOC433328氟化銣 AR

MYD88(Human myeloid differentiation primary response gene 88) ELISA Kit  人髓樣分化因子初次應(yīng)答基因88化銣 99.9%

Ifi205(Human interferon activated gene 205) ELISA Kit  人干擾素活化基因205硫酸銣 SP

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