產(chǎn)品特點：

1、公司產(chǎn)品僅用于科研不需要單獨純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產(chǎn)品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不??濃度的標準品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

產(chǎn)品組成:

下列是公司正熱銷的產(chǎn)品：

基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）明膠酶譜法（zymography）5次Antibiotic agar  GROVE and RANDALL medium 瓊脂1號二甲酚橙四鈉

電泳分析試劑盒Antibiotic agar No.2 GROVE and RANDALL medium No.2 瓊脂2號苯甲酸

蛋白電泳染色試劑專題Antibiotic agar No.5 GROVE and RANDALL medium No.5瓊脂5號二十七烷

名稱規(guī)格Antibiotic agar 1 GROVE and RANDALL medium 1 瓊脂11號人黑色素（MSH）ELISA試劑盒,MSH ELISA kit

通用型蛋白電泳考馬斯亮藍染色試劑盒10次Antibiotic agar 2 GROVE and RANDALL medium 2 瓊脂12號人抗網(wǎng)硬蛋白抗體（ARA）ELISA試劑盒, ARA ELISA kit

麥黃酮蛋白電泳考馬斯亮藍染色試劑盒10次Antibiotic Brothe 肉湯人抗天然脫氧核糖核酸抗體（n-DNA-Ab）ELISA試劑盒,n-DNA-Ab ELISA

蛋白電泳硝酸銀染色試劑盒10次APT agar APT瓊脂人抗核小體抗體IgG（AnuA-IgG）ELISA試劑盒,AnuA-IgG ELISA KIT

蛋白電泳尼羅紅染色試劑盒20次Arginie broth acc.to SCHUBERT (ABGP medium) 精氨酸肉湯人沙眼衣原體抗體（CT）ELISA試劑盒,CT ELISA

蛋白電泳SYPRO橙色染色試劑盒10次Ass agar（D.S.T agar）Antibiotic sulfonamide sensitivity-test agar人戊型肝炎病IgM（HEV-IgM）ELISA試劑盒,HEV-IgM ELISA

蛋白電泳伊紅黃色染色試劑盒10次磺靈敏性測試瓊脂人丙型肝炎IgG（HCV-IgG）ELISA試劑盒,HCV-IgG ELISA

蛋白電泳固綠染色試劑盒10次Azide dextrose broth 疊氮葡萄糖肉湯人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3（GPC-3）ELISA試劑盒,GPC-3 ELISA

蛋白電泳麗春紅染色試劑盒10次Bacillus cereus selective supplement 蠟狀芽孢桿菌選擇添加劑人膽固醇酯轉(zhuǎn)移蛋白（CETP）ELISA試劑盒,CETP ELISA 96T/48T

銅蛋白電泳染色試劑盒10次BAIRD-PARKER agar Staphylococcus selective agar base acc.to人色素C（Cyt-C）ELISA試劑盒,Cyt-C ELISA

蛋白雜交試劑專題BAIRD-PARKER 貝爾德-帕克瓊脂/葡萄狀球菌選擇培養(yǎng)基人吡哆醛/吡哆醇維生素B6激酶（PDXK）ELISA試劑盒,PDXK ELISA

名稱規(guī)格BAT Agar BAT瓊脂（脂環(huán)芽孢桿菌培養(yǎng)基）人尿激酶（UK）ELISA試劑盒,
腸侵襲性大腸桿菌（EIEC）檢測試劑盒(熒光-PCR法)Kim-1(Human Kidney injury molecule 1) ELISA Kit  人腎損傷分子1硬脂酸甲酯 CP,45%（GC）

AQP-5(Human Aquaporin 5) ELISA Kit  人水通道蛋白5硬脂酸甲酯 分析標準品,>99.5% (GC)

AQP-4(Human Aquaporin 4) ELISA Kit  人水通道蛋白4色標Standard for GC,≥99.5% (GC)

AQP-3(Human Aquaporin 3) ELISA Kit  人水通道蛋白3硬脂酸甲酯 95%

AQP-2(Human Aquaporin 2) ELISA Kit  人水通道蛋白2油酸甲酯 CP，≥60.0% (GC)

AQP-1(Human Aquaporin 1) ELISA Kit  人水通道蛋白14-雄烯-4--3,17-二酮 99%

AQP-0(Human Aquaporin 0) ELISA Kit  人水通道蛋白0(R)-(+)-苧烯 97%

RF(Human rheumatoid factor) ELISA Kit  人類風濕因子四烷絡(luò)合物 1M solution in THF

使用方法:

一:培養(yǎng)細胞預處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養(yǎng)細胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細胞兩次,離心得到的細胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細胞預處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細胞兩次,得到的白細胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取

5.在細胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現(xiàn)沉淀漂浮是正?，F(xiàn)象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結(jié)合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發(fā)。

13. 重復上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結(jié)合DNA能力較強,如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機械斷裂,電泳時DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。

產(chǎn)品留言

標題

聯(lián)系人

聯(lián)系電話

內(nèi)容

驗證碼

點擊換一張

注：1.可以使用快捷鍵Alt+S或Ctrl+Enter發(fā)送信息!
2.如有必要,請您留下您的詳細聯(lián)系方式!