產品特點：

1、公司產品僅用于科研不需要單獨純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

產品組成:

下列是公司正熱銷的產品：

微型RNA（miRNA）目標基因探測試劑盒5次纖溶抑制因子(TAFI)重組蛋白人空腸彎曲菌黏附蛋白（PEB1）ELISA試劑盒,PEB1 ELISA

微型RNA（miRNA）表達載體連接試劑盒10次纖維蛋白原α(FGα)重組蛋白人抑肽酶（AP）ELISA試劑盒,AP ELISA

微型分子直接細胞轉染試劑盒10次纖維蛋白原β(FGβ)重組蛋白人多巴脫羧酶（DDC）ELISA試劑盒,

微型RNA（miRNA）表達載體細胞轉染試劑盒10次纖維介素蛋白(FGL2)重組蛋白人α肌動蛋白（α Actin）ELISA試劑盒,

DICER酶基因敲除試劑盒5次線粒體超氧化物歧化酶(SOD2)重組蛋白人血管**素2（ANG-2）ELISA試劑盒,

微型RNA（miRNA）文庫構建技術服務1個樣本線粒體肌酸激酶1A(CKMT1A)重組蛋白人凝血因子Ⅶ（FⅦ）ELISA試劑盒,

特定微型RNA目標基因探測技術服務1個分子線粒體外膜轉位酶70A(TOMM70A)重組蛋白小鼠β連環(huán)蛋白/聯蛋白（β-Cat）ELISA試劑盒,

微型RNA文庫數據庫（在建）會員制心肌肌鈣蛋白I(TNNI3)重組蛋白小鼠補體蛋白4（C4）ELISA試劑盒,

核酸電泳試劑專題心肌營養(yǎng)素1(CT1)重組蛋白大鼠乙醇脫氫酶（ADH）ELISA試劑盒,

名稱規(guī)格心鈉肽(ANP)重組蛋白大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa（GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61）ELISA試劑盒,

同位素法DNA南方雜交印跡試劑盒5次心型脂肪酸結合蛋白(FABP3)重組蛋白大鼠熱休克蛋白60（Hsp-60）ELISA試劑盒,

同位素法DNA南方雜交印跡完全試劑盒5次鋅指同源框蛋白4(ZFHX4)重組蛋白大鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ（cTn-Ⅰ）ELISA試劑盒,

非同位素HRP化學發(fā)光法DNA南方雜交印跡完全試劑盒5次信號素3A(SEMA3A)重組蛋白大鼠抑制素A（INH-A）ELISA試劑盒,

非同位素AP化學發(fā)光法DNA南方雜交印跡完全試劑盒5次信號素3B(SEMA3B)重組蛋白大鼠胃動素（MTL）ELISA試劑盒,

非同位素地高辛化學發(fā)光法DNA南方雜交完全試劑盒5次信號素3C(SEMA3C)重組蛋白大鼠生長抑素（SS）ELISA試劑盒,
鱖魚彈狀病毒(SCRV)檢測試劑盒(熒光-PCR法)GLUT1(Human Glucose transporter 1) ELISA Kit  人葡萄糖轉運蛋白1叔丁 AR,98%

LDL(Human low density lipoprotein) ELISA Kit  人低密度脂蛋白環(huán)己烷 AR，99.5%

AA(Human Arachidonic Acid) ELISA Kit  人花生四烯酸環(huán)十二碳三烯 98%

BSP(Human bone sialoprotein) ELISA Kit  人骨涎蛋白鄰苯二酚 AR,99.0%

BALP(Human bone alkaline phosphatase) ELISA Kit  人骨堿性磷酸酶鄰苯二甲酸二壬酯(異構體的混和物) 97%

CTX(Human Cyclophosphamide) ELISA Kit  人環(huán)磷酰1,4-二氧六環(huán) AR,99%,含10ppm BHT穩(wěn)定劑

1,3-DPG(Human 1,3-Disphosphoglycerate, ELISA Kit  人1,3-二磷酸甘油酸1,4-二氧六環(huán) ACS, ≥99.0%

1,5-AG(Human 1,5-anhydroglucitol) ELISA Kit  人1,5-脫水葡萄糖/1,5-脫水山梨異辛酸  >99.0% (GC)

使用方法:

一:培養(yǎng)細胞預處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養(yǎng)細胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細胞兩次,離心得到的細胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細胞預處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細胞兩次,得到的白細胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取

5.在細胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現沉淀漂浮是正常現象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發(fā)。

13. 重復上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結合DNA能力較強,如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機械斷裂,電泳時DNA可能不呈現專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。

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