產(chǎn)品特點：

1、公司產(chǎn)品僅用于科研不需要單獨純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產(chǎn)品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

產(chǎn)品組成:

使用方法:

一:培養(yǎng)細胞預(yù)處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養(yǎng)細胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細胞兩次,離心得到的細胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細胞預(yù)處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預(yù)處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細胞兩次,得到的白細胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取

5.在細胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復(fù)顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現(xiàn)沉淀漂浮是正常現(xiàn)象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結(jié)合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發(fā)。

13. 重復(fù)上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預(yù)熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結(jié)合DNA能力較強,如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機械斷裂,電泳時DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷的產(chǎn)品：
DMDC處理試劑盒100次嗜鉻蛋白A(CHGA)重組蛋白小鼠胰島素原（PI）ELISA試劑盒,

RNA樣品儲存液50毫升嗜酸粒趨化因子(ECF)重組蛋白小鼠熱休克蛋白40（Hsp-40）ELISA試劑盒,

純化RNA樣品儲存液50毫升瘦素(LEP)重組蛋白大鼠白介素21（IL-21）ELISA試劑盒,

mRNA純化樹脂再生試劑盒20次瘦素受體(LEPR)重組蛋白大鼠膀胱腫瘤抗原（BTA）ELISA試劑盒,

RNA比色法定量檢測試劑盒20次衰變加速因子(DAF)重組蛋白大鼠抗胰蛋白酶（AT）ELISA試劑盒,

RNA熒光（RiboGreen）定量檢測試劑盒20次雙調(diào)蛋白(AREG)重組蛋白兔凝血酶原片段F1+2（F1+2）ELISA試劑盒,

RT－PCR試劑專題雙解絲蛋白1(TWF1)重組蛋白兔轉(zhuǎn)化生長因子β2（TGFβ2）ELISA試劑盒,

名稱規(guī)格水通道蛋白1(AQP1)重組蛋白白介素16（IL-16）ELISA試劑盒--動物，人

兩步法RT－PCR試劑盒20/50次水通道蛋白2(AQP2)重組蛋白白介素12（IL-12/P70）ELISA試劑盒--動物，人

一步法RT－PCR試劑盒20/50次水通道蛋白5(AQP5)重組蛋白麥 康凱瓊脂3號     用于腸道致病菌的選擇性分離、培養(yǎng)（OXOID方法）

直接細胞克隆兩步法逆轉(zhuǎn)錄PCR試劑盒100次水通道蛋白9(AQP9)重組蛋白D-亮氨酸

兩步法RT－PCR熒光定量試劑盒20/50次絲氨酸蛋白酶1(PRSS1)重組蛋白2′-脫氧胞苷鹽酸

逆轉(zhuǎn)錄RT試劑盒20/50次絲氨酸蛋白酶23(PRSS23)重組蛋白4-甲基傘形酮酰-β-D-吡喃葡糖酸苷

體外RNA轉(zhuǎn)錄合成試劑盒10次絲蛋白結(jié)合LIM蛋白1(FBLIM1)重組蛋白硅酯H-295

體外加帽RNA轉(zhuǎn)錄合成試劑盒10次絲裂原激活蛋白激酶14(MAPK14)重組蛋白人白介素8（IL-8/CXCL8）ELISA試劑盒, IL-8/CXCL8 ELISA kit
對蝦傳染性肌肉壞死病毒(IMNV)檢測試劑盒(熒光-PCR法)RBP(Human Retinol binding protein) ELISA Kit  人視黃結(jié)合蛋白自封袋 26*16（mm）4.5絲

8-OHdG(Human hydroxylysine) ELISA Kit  人8羥基脫氧鳥苷間氨基苯甲酸 99%

Hyl(Human hydroxylysine) ELISA Kit  人羥賴氨酸對氨基苯甲酰 98%

GAP(Human GTPase activating protein) ELISA Kit  人GTP酶活化蛋白對氨基苯甲酸 AR，99%

Apo-H(Human Apolipoprotein H) ELISA Kit  人載脂蛋白H2,2-雙[4-(4-氨基苯氧基)苯基]烷 98%

GPI(Human glycophosphatidylinositol) ELISA Kit  人糖磷脂酰肌對氨基苯甲酸丁酯 98%

PWM(Human pokeweed mitogen) ELISA Kit  人美洲商陸素雙(2,2,6,6-四甲基-4-基)癸二酸酯 98%

LPS(Human Lipopolysaccharides) ELISA Kit  人脂多糖/內(nèi)素4,4'-雙(4-氨苯氧基)聯(lián)苯 97%

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