產(chǎn)品特點：

1、公司產(chǎn)品僅用于科研不需要單獨純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產(chǎn)品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

產(chǎn)品組成:

使用方法:

一:培養(yǎng)細胞預(yù)處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養(yǎng)細胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細胞兩次,離心得到的細胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細胞預(yù)處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預(yù)處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細胞兩次,得到的白細胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取

5.在細胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復(fù)顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現(xiàn)沉淀漂浮是正?，F(xiàn)象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結(jié)合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發(fā)。

13. 重復(fù)上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預(yù)熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結(jié)合DNA能力較強,如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當(dāng)于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機械斷裂,電泳時DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷的產(chǎn)品：
胞核微型RNA（Pre-RNA）電泳法分離試劑盒20次無翅型MMTV整合位點家族成員3(WNT3)重組蛋白小鼠硫氧化還原蛋白（Trx）ELISA試劑盒,

胞核微型RNA（Pre-RNA）超濾法分離試劑盒10次無翅型MMTV整合位點家族成員4(WNT4)重組蛋白小鼠脂蛋白α（Lp-α）ELISA試劑盒,

微型RNA（miRNA）擴增試劑盒20次程序性死亡蛋白6相互作用蛋白(PDCD6IP)重組蛋白兔載脂蛋白A1（apo-A1）ELISA試劑盒,

通用型微型RNA（miRNA）擴增試劑盒20次性T-關(guān)聯(lián)抗原4(CTLA4)重組蛋白BDS培養(yǎng)基

微型RNA（miRNA）定量擴增分析試劑盒10/20次間粘附分子2(ICAM2)重組蛋白D-賴氨酸鹽酸鹽

通用型微型RNA（miRNA）定量擴增分析試劑盒10/20次間粘附分子3(ICAM3)重組蛋白阿魏酸 Ferulic Acid

微型RNA（miRNA）北方雜交試劑盒5次間粘附分子5(ICAM5)重組蛋白二氫丹參酮 I Dihydrotanshinone I

微型RNA（miRNA）酶保護分析試劑盒5次色素P450家族成員7A1(CYP7A1)重組蛋白環(huán)孢菌素D Cyclosporin D

微型RNA（miRNA）文庫構(gòu)建技術(shù)試劑盒5次外基質(zhì)磷酸糖蛋白(MEPE)重組蛋白Taq plus酶

特定微型RNA目標基因探測技術(shù)試劑盒5次外信號調(diào)節(jié)激酶2(ERK2)重組蛋白SP6 RNA聚合酶

微型RNA（miRNA）同位素探針制備試劑盒10次周期素D1(CCND1)重組蛋白2′-脫氧鳥苷-5′-二磷酸三鈉鹽

特定微型RNA（miRNA）擴增引物合成2 U周期素D2(CCND2)重組蛋白萘酚AS-TR磷酸鹽

特定成熟微型RNA（miRNA）分子合成2 U纖連蛋白(FN)重組蛋白人結(jié)腸癌抗原（CCA）ELISA試劑盒,CCA ELISA kit

特定成熟微型RNA（miRNA）反義抑制劑合成2 U纖溶酶原(Plg)重組蛋白人抗神經(jīng)元核抗體1型/抗Hu抗體（ANNA-1/Hu）ELISA試劑盒, ANNA-1/Hu EL

特定成熟微型RNA（miRNA）2位修飾抑制劑合成2 U纖溶酶原激活物抑制因子1(PAI1)重組蛋白人抗肝腎微粒體抗體（LKM）ELISA試劑盒,LKM ELISA
肝胰腺細小病毒（HPV）檢測試劑盒(熒光-PCR法)CALD(Human Caldesmon) ELISA Kit  人鈣調(diào)結(jié)合蛋白3,5-二氨基三氟甲苯 98%

CaN(Human calcineurin) ELISA Kit  人鈣調(diào)磷酸酶4-叔丁基環(huán)己 98%

Human CTX-2 ELISA Kit  人骨退化特異標志物間三氟甲苯 99%

CR(Human Calretinin) ELISA Kit  人鈣結(jié)合蛋白對羥基苯甲酸 99%

BMP-6(Human Bone Morphogenetic Protein 6) ELISA Kit  人骨形成蛋白6對羥基苯甲酸 Standard for GC, ≥99.5% (GC)

FABP(Human fatty acid-binding protein) ELISA Kit  人脂肪酸結(jié)合蛋白對羥基苯甲酸 ≥99%

ABCA1(Human ATP-binding cassette transporter A1) ELISA Kit  人腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運體A1苯乙酮  AR,≥98.0% (GC)

HRGP(Human Hydroxyproline-Rich Glycoprotein) ELISA Kit  人羥脯氨酸糖蛋白苯  AR, ≥99.5%

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