操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

產(chǎn)品特點：

1、公司產(chǎn)品僅用于科研不需要單獨純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產(chǎn)品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

產(chǎn)品組成:

使用方法:

一:培養(yǎng)細胞預處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養(yǎng)細胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細胞兩次,離心得到的細胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細胞預處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細胞兩次,得到的白細胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取

5.在細胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現(xiàn)沉淀漂浮是正?，F(xiàn)象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發(fā)。

13. 重復上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結合DNA能力較強,如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機械斷裂,電泳時DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷的產(chǎn)品：
名稱規(guī)格親環(huán)素A(CYPA)重組蛋白D-鳥氨酸鹽酸鹽

樹脂法血跡DNA萃取試劑盒20次親環(huán)素B(CYPB)重組蛋白兒茶素 （+）-Catechin

樹脂法毛發(fā)DNA萃取試劑盒20次趨化因子C-C-基元配體14(CCL14)重組蛋白替卡西林鈉

樹脂法唾液DNA萃取試劑盒20次趨化因子C-C-基元配體3樣蛋白1(CCL3L1)重組蛋白尿苷

樹脂法骨DNA萃取試劑盒20次趨化因子C-C-基元受體2(CCR2)重組蛋白硫酸亞鈰（III）

樹脂法精液DNA萃取試劑盒20次趨化因子C-C-基元受體3(CCR3)重組蛋白人抗膠原蛋白抗體（CLA）ELISA試劑盒,CLA ELISA

DNA連接試劑專題趨化因子C-X3-C-基元配體1(CX3CL1)重組蛋白人氫 化可的松（HYD）ELISA試劑盒,HYD ELISA

名稱規(guī)格趨化因子C-X-C-基元配體16(CXCL16)重組蛋白人基質金屬蛋白酶11（MMP11）ELISA試劑盒,

通用型DNA克隆試劑盒（不包括內(nèi)切酶）10次趨化因子C-X-C-基元受體3(CXCR3)重組蛋白人γ谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-ECS）ELISA試劑盒,

通用型DNA克隆完全試劑盒（包括內(nèi)切酶）10次趨化因子C-X-C-基元受體5(CXCR5)重組蛋白人鳥苷酸解離抑制因子（GDI）ELISA試劑盒,

DNA定向連接克隆完全試劑盒（包括雙內(nèi)切酶）10次趨化因子C-X-C-基元受體6(CXCR6)重組蛋白人血小板**素（TPO）ELISA試劑盒,

通用型DNA平滑末端連接克隆試劑盒10次去唾液酸糖蛋白受體1(ASGPR1)重組蛋白大鼠血栓前體蛋白（TpP）ELISA試劑盒,

通用型DNA平滑末端連接克隆完全試劑盒（包括內(nèi)切酶）10次固酮合酶(ALDOS)重組蛋白大鼠艾杜糖硫酸酯酶（IDS）ELISA試劑盒,

pZERO載體克隆試劑盒（不包括內(nèi)切酶）10次糖還原酶相似蛋白1(ARL1)重組蛋白大鼠骨成型蛋白2（BMP-2）ELISA試劑盒,

pZERO載體克隆試劑盒（包括內(nèi)切酶）10次熱休克蛋白40(HSP40)重組蛋白乙酰肝素酶（HPA）ELISA試劑盒--動物，人
對蝦桃拉病毒(TSV)檢測試劑盒(熒光-PCR法)CPSA(Human complex edprostate specific antigen) ELISA Kit  人復合前列腺特異性抗原4-(三氟甲基)芐溴 98%

HSV II -Ab(Human Herpes simplexvirus II antibody) ELISA Kit  人單純皰疹病Ⅱ型抗體頻那 97%

Human Estrogen-induced protein pS2 ELISA Kit  人雌誘導蛋白PS2基硅乙酸酯 98%

BV(Human bacterial vaginosis) ELISA Kit  人性病10-十一烯酸 98%

HSV I Ab(Human Herpes simplexvirus I antibody) ELISA Kit  人單純皰疹?、裥涂贵w溴乙烯 1.0 M THF溶液

Human Estrogen-induced protein pS2 ELISA Kit  人雌誘導蛋白PS2維生素A 95%

HPV-IgM(Human papillomavirus IgM) ELISA Kit  人狀瘤病抗體IgM渥曼青霉素  98%

HPV-IgG(Human papillomavirus IgG) ELISA Kit  人狀瘤病抗體IgG4,8-二羥基喹啉-2-甲酸 96%

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