產(chǎn)品特點：

1、公司產(chǎn)品僅用于科研不需要單獨純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產(chǎn)品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

產(chǎn)品組成:

下列是公司正熱銷的產(chǎn)品：

冰凍切片組織鈣鈉交換體（NCX）蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次谷轉(zhuǎn)氨酶(ALT)重組蛋白兔子腦鈉素/腦鈉尿肽（BNP）ELISA試劑盒,

石蠟切片組織鈣鈉交換體（NCX）蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶α1(GSTα1)重組蛋白魚雌二醇

載玻片細胞鈣鈉交換體（NCX）蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20次谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶α3(GSTα3)重組蛋白白介素12（IL-12/P40）ELISA試劑盒--動物，人

冰凍切片組織鈣鈉交換體（NCX）蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20次谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶α4(GSTα4)重組蛋白L-多巴

石蠟切片組織鈣鈉交換體（NCX）蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20次谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶θ1(GSTθ1)重組蛋白FMOC-L-色氨酸

細胞鈣鈉交換體（NCX）蛋白表達比色法定量檢測試劑盒10/50 次谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶κ1(GSTκ1)重組蛋白5-胞苷一磷酸二鈉鹽

細胞鈣鈉交換體（NCX）蛋白表達熒光定量檢測試劑盒10/50 次谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶μ2(GSTμ2)重組蛋白氯化膽固醇

鈣鈉交換體（NCX）蛋白表達西方雜交分析試劑盒5次谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶π1(GSTπ1)重組蛋白人N端前腦鈉素（NT-proBNP）ELISA試劑盒,NT-proBNP ELISA kit

鈣鈉交換體（NCX）蛋白共沉淀分析試劑盒5次骨保護素(OPG)重組蛋白人P27蛋白（P27）ELISA試劑盒,P27 ELISA kit

鈣鈉交換體（NCX）蛋白表達elisa試劑盒25次骨成型蛋白2(BMP2)重組蛋白人抗肝胞質(zhì)1型抗體（LC1）ELISA試劑盒, LC1 ELISA kit

細胞RyR受體蛋白表達流式細胞儀檢測試劑盒10/20次骨成型蛋白4(BMP4)重組蛋白人紅**素受體（EPOR）ELISA試劑盒,EPOR ELISA

載玻片細胞RyR受體蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次骨成型蛋白7(BMP7)重組蛋白人乳酸脫氫酶（LDH）ELISA試劑盒, LDH ELISA

冰凍切片組織RyR受體蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次骨成型蛋白受體1A(BMPR1A)重組蛋白人肌球蛋白（MYS）ELISA試劑盒,

石蠟切片組織RyR受體蛋白表達熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次骨成型蛋白受體1B(BMPR1B)重組蛋白人IPO-38蛋白（IPO38）ELISA試劑盒,

載玻片細胞RyR受體蛋白表達NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20次骨鈣素(OC)重組蛋白人阿拉伯半乳糖蛋白（AGPs）ELISA試劑盒,
無乳鏈球菌(StA)檢測試劑盒(熒光-PCR法)dDAVP(Human Desmopressin/1-desamino-8-D-arginine vasopressin) ELISA Kit  人去氨加壓素/1-去氨基-8-右旋-精氨酸加壓素硫化鉛 SP

M-AChR M3(Human muscarinic acetylcholine receptor M3) ELISA Kit  人蕈堿型乙酰膽堿受體亞型M3硫化鉛 99.9% metals basis，200mesh,powder

TR(Human Testoterone recepter) ELISA Kit  人睪酮受體硫化鉛 99.999% metals basis

M-AChR(Human muscarinic acetylcholine receptor) ELISA Kit  人蕈堿型乙酰膽堿受體硫化鉛 Pb ≥82%

Gp49a(Human glycoprotein 49A) ELISA Kit  人糖蛋白49A氯化釹(Ⅲ)  99.9% metals basis

Inhbb(Human inhibin beta-B) ELISA Kit  人抑制素β-B釤粉 99.9% metals basis,200目

OXR(Human Orexin receptor) ELISA Kit  人食欲素受體氯化釤(III),六水 99%

GHRP-Ghrelin(Human growth hormone releasing peptide-Ghrelin) ELISA Kit  人生長釋放肽ghrelin鋅粒 99.99% metals basis

使用方法:

一:培養(yǎng)細胞預(yù)處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養(yǎng)細胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細胞兩次,離心得到的細胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細胞預(yù)處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用??存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預(yù)處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細胞兩次,得到的白細胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取

5.在細胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復(fù)顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現(xiàn)沉淀漂浮是正常現(xiàn)象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結(jié)合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發(fā)。

13. 重復(fù)上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預(yù)熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結(jié)合DNA能力較強,如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當(dāng)于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機械斷裂,電泳時DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。

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