產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、公司產(chǎn)品僅用于科研不需要單獨(dú)純化線粒體，柱式法純化，操作簡(jiǎn)單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個(gè)動(dòng)物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產(chǎn)品只適合于動(dòng)物材料，不適合于植物材料，因?yàn)橹参锞€粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

產(chǎn)品組成:

使用方法:

一:培養(yǎng)細(xì)胞預(yù)處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細(xì)胞兩次,離心得到的細(xì)胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細(xì)胞預(yù)處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動(dòng)物組織剪碎(芝麻大小*),轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動(dòng)物組織,因?yàn)閮瞿^(guò)程中形成的冰晶會(huì)將線粒體刺破,使其DNA釋放出來(lái)被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預(yù)處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細(xì)胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細(xì)胞兩次,得到的白細(xì)胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動(dòng)物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級(jí))四:mtDNA提取

5.在細(xì)胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復(fù)顛倒混勻10次。千萬(wàn)不要?jiǎng)×艺袷帯?/span>

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過(guò)8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時(shí)的溶液比重較大,有時(shí)候出現(xiàn)沉淀漂浮是正?，F(xiàn)象,取上清時(shí)避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結(jié)合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會(huì)揮發(fā)。

13. 重復(fù)上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會(huì)影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時(shí)不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個(gè)新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預(yù)熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結(jié)合DNA能力較強(qiáng),如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當(dāng)于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來(lái)洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個(gè)動(dòng)物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機(jī)械斷裂,電泳時(shí)DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷的產(chǎn)品：
冰凍切片組織線粒體復(fù)合物IV蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次發(fā)動(dòng)蛋白2(DNM2)重組蛋白大鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類（MHCⅠ/AgBⅠ/H-1Ⅰ）ELISA試劑盒,

石蠟切片組織線粒體復(fù)合物IV蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次泛素(Ub)重組蛋白大鼠腦鈉素/腦鈉尿肽（BNP）ELISA試劑盒,

細(xì)胞線粒體復(fù)合物IV蛋白表達(dá)比色法定量檢測(cè)試劑盒10/50 次泛素激活酶樣蛋白(UBE1L)重組蛋白兔血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（VEGF）ELISA試劑盒,

細(xì)胞線粒體復(fù)合物IV蛋白表達(dá)熒光定量檢測(cè)試劑盒10/50 次泛素交叉反應(yīng)蛋白(UCRP)重組蛋白腸球菌瓊脂（膽鹽－七葉苷－疊氮鈉???脂）

線粒體復(fù)合物IV蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒5次泛素結(jié)合酶E2A(UBE2A)重組蛋白L-天冬酰

線粒體復(fù)合物IV蛋白共沉淀分析試劑盒5次泛素連接酶E3A(UBE3A)重組蛋白DL-苯丙氨酸

線粒體復(fù)合物IV蛋白表達(dá)elisa試劑盒25次防御素β103B(DEFβ103B)重組蛋白BOC-D-谷氨酰

細(xì)胞線粒體復(fù)合物V蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測(cè)試劑盒10/20次防御素β112(DEFβ112)重組蛋白茴芹內(nèi)酯 Pimpinellin

載玻片細(xì)胞線粒體復(fù)合物V蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次防御素β113(DEFβ113)重組蛋白2′-脫氧胞苷

冰凍切片組織線粒體復(fù)合物V蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次防御素β124(DEFβ124)重組蛋白4-氯苯氧乙酸

石蠟切片組織線粒體復(fù)合物V蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次防御素β126(DEFβ126)重組蛋白花寶2號(hào)

載玻片細(xì)胞線粒體復(fù)合物V蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次防御素β131(DEFβ131)重組蛋白巖藻多糖

冰凍切片組織線粒體復(fù)合物V蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次防御素β2(DEFβ2)重組蛋白人生長(zhǎng)（HGH）ELISA試劑盒,HGH ELISA

石蠟切片組織線粒體復(fù)合物V蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測(cè)試劑盒10/20次分泌跨膜蛋白1(SECTM1)重組蛋白人肌鈣蛋白T（Tn-T）ELISA試劑盒,

細(xì)胞線粒體復(fù)合物V蛋白表達(dá)比色法定量檢測(cè)試劑盒10/50 次封閉蛋白9(CLDN9)重組蛋白人鳥苷酸交換因子（GEF）ELISA試劑盒,
傳染性對(duì)蝦皮下和造血器官壞死病毒(IHHNV)檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)DF-Ab(Human dengue fever antibody) ELISA Kit  人登革熱抗體甲基氧基硅烷 98%

FLU(Human Influenza viruses IgG) ELISA Kit  人流感病抗體IgG四甲氧基硅烷 98%

ADV-IgM(Human Adenovirus IgM) ELISA Kit  人腺病IgM2-氨基-5-氯二苯甲酮 98%

ADV-IgG(Human Adenovirus IgG) ELISA Kit  人腺病IgG2,4'-二氟二苯甲酮 98%

RV(Human RotavirusIgM) ELISA Kit  人輪狀病IgM2,4-二羥基苯乙酮 99%

ECHO IgM(Human EchoVirus IgM) ELISA Kit  人艾柯病IgM4,4'-二氯二苯甲酮 99%

RSV(Human respiratory syncytial virus antibody) ELISA Kit  人抗呼吸道合胞病抗體間甲 98%

MV IgM(Human measlesvirus IgM) ELISA kit  人麻疹病IgM3-己酮 98%

產(chǎn)品留言

標(biāo)題

聯(lián)系人

聯(lián)系電話

內(nèi)容

驗(yàn)證碼

點(diǎn)擊換一張

注：1.可以使用快捷鍵Alt+S或Ctrl+Enter發(fā)送信息!
2.如有必要,請(qǐng)您留下您的詳細(xì)聯(lián)系方式!