產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、公司產(chǎn)品僅用于科研不需要單獨(dú)純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個(gè)動(dòng)物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產(chǎn)品只適合于動(dòng)物材料，不適合于植物材料，因?yàn)橹参锞€粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各???不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

產(chǎn)品組成:

下列是公司正熱銷的產(chǎn)品：

細(xì)胞PAR-1蛋白表達(dá)熒光定量檢測試劑盒10/50 次人牙周膜成纖維裂解物人白介素1可溶性受體Ⅰ（IL-1sRⅠ）ELISA試劑盒,

PAR-1蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒5次人食道上皮裂解物人基質(zhì)金屬蛋白酶抑制因子4（TIMP-4）ELISA試劑盒,TIMP-4 ELISA kit

PAR-1蛋白共沉淀分析試劑盒5次人食道平滑肌裂解物人膽酸（CA）ELISA試劑盒, CA ELISA kit

PAR-1蛋白表達(dá)elisa試劑盒25次人腸微血管內(nèi)皮裂解物人素相關(guān)蛋白A（CagA）ELISA試劑盒, CagA ELISA kit

細(xì)胞PAR-2蛋白表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測試劑盒10/20次人腸平滑肌裂解物人胃泌素釋放多肽（GRP）ELISA試劑盒, GRP ELISA kit

載玻片細(xì)胞PAR-2蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次人結(jié)腸平滑肌裂解物人前列環(huán)素（PGI）ELISA試劑盒, PGI ELISA

冰凍切片組織PAR-2蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次人肺微血管內(nèi)皮裂解物人早老素2（PS-2）ELISA試劑盒, PS-2 ELISA

石蠟切片組織PAR-2蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒10/20次人肺動(dòng)脈內(nèi)皮裂解物人游離狀腺原氨酸（Free-T3）ELISA試劑盒,Free-T3 ELISA

載玻片細(xì)胞PAR-2蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20次人肺動(dòng)脈平滑肌裂解物人絨毛膜促性腺（HCG）ELISA試劑盒,HCG ELISA

冰凍切片組織PAR-2蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20次人肺動(dòng)脈成纖維裂解物人總前列腺特異抗原（tPSA）ELISA試劑盒, tPSA ELISA

石蠟切片組織PAR-2蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒10/20次人肺泡上皮裂解物人αL艾杜糖苷酸酶（IDUA）ELISA試劑盒,

細(xì)胞PAR-2蛋白表達(dá)比色法定量檢測試劑盒10/50 次人支氣管上皮裂解物人1,3-βD葡葡糖苷酶（1,3-βD-Glu）ELISA試劑盒,

細(xì)胞PAR-2蛋白表達(dá)熒光定量檢測試劑盒10/50 次人氣管上皮裂解物人類似RIKEN cDNA 2610307008 基因 ELISA試劑盒,

PAR-2蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒5次人小氣道上皮裂解物人白球蛋白樣受體亞家族B成員4（LILRB4）ELISA試劑盒,

PAR-2蛋白共沉淀分析試劑盒5次人肺成纖維裂解物人糖鏈抗原19-9（CA19-9）ELISA試劑盒,
馬皰疹病毒4型（EHV-IV）檢測試劑盒（熒光-PCR法）BJP(Human Bence-Jones protein) ELISA Kit  人本周蛋白聚乙二 average Mn 200

CEF(Human Carcinoembryonic Ferritin) ELISA Kit  人癌胚鐵蛋白聚乙二 average Mn 1000

SCCAg(Human squamous cell carcinoma related antigen) ELISA Kit  人鱗狀癌相關(guān)抗原聚乙二 average Mn 1500

TSA(Human tumor specific antigen) ELISA Kit  人腫瘤特異性抗原聚乙二 average Mn 2000

MMSAM(Human melanoma metastasis surface adhesion molecule) ELISA Kit  人黑色素瘤轉(zhuǎn)移表面黏附分子聚乙二 average Mn 4000

BRCA-2(Human breast cancer susceptibility protein 2) ELISA Kit  人癌易感蛋白2聚乙二 average Mn 6000

ASK-1(Human apoptosis signal regulating kinase 1) ELISA Kit  人凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶I聚乙二 average Mn 800

BAX(Human Bcl-2 associated X protein) ELISA Kit  人Bcl-2相關(guān)X蛋白聚乙二 average Mn 600

使用方法:

一:培養(yǎng)細(xì)胞預(yù)處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細(xì)胞兩次,離心得到的細(xì)胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細(xì)胞預(yù)處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動(dòng)物組織剪碎(芝麻大小*),轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動(dòng)物組織,因?yàn)閮瞿^程中形成的冰晶會(huì)將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預(yù)處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細(xì)胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細(xì)胞兩次,得到的白細(xì)胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動(dòng)物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取

5.在細(xì)胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復(fù)顛倒混勻10次。千萬不要?jiǎng)×艺袷帯?/span>

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時(shí)的溶液比重較大,有時(shí)候出現(xiàn)沉淀漂浮是正常現(xiàn)象,取上清時(shí)避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結(jié)合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會(huì)揮發(fā)。

13. 重復(fù)上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會(huì)影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時(shí)不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個(gè)新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預(yù)熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結(jié)合DNA能力較強(qiáng),如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當(dāng)于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個(gè)動(dòng)物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機(jī)械斷裂,電泳時(shí)DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。

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