操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。

產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、公司產(chǎn)品僅用于科研不需要單獨(dú)純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個動物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產(chǎn)品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因?yàn)橹参锞€粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

產(chǎn)品組成:

使用方法:

一:培養(yǎng)細(xì)胞預(yù)處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養(yǎng)細(xì)胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細(xì)胞兩次,離心得到的細(xì)胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細(xì)胞預(yù)處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因?yàn)閮瞿^程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預(yù)處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細(xì)胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細(xì)胞兩次,得到的白細(xì)胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取

5.在細(xì)胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復(fù)顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時(shí)的溶液比重較大,有時(shí)候出現(xiàn)沉淀漂浮是正常現(xiàn)象,取上清時(shí)避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結(jié)合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發(fā)。

13. 重復(fù)上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時(shí)不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預(yù)熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結(jié)合DNA能力較強(qiáng),如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當(dāng)于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機(jī)械斷裂,電泳時(shí)DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷的產(chǎn)品：
脂質(zhì)過氧化物亞油酸（linoleic acid）ELISA定量測定試劑盒48/96次非洲綠猴腎（SV40轉(zhuǎn)化）；COS-1 [COS1]人生長相關(guān)蛋白43（GAP-43）ELISA試劑盒,

脂質(zhì)過氧化物亞油酸（linoleic acid）高效液相色譜 （HPLC）分析試劑盒20次EB病轉(zhuǎn)化的絨猴；B95-8小鼠Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽（ⅠCTP）ELISA試劑盒,

細(xì)胞硫代酸反應(yīng)物（TBARS）比色法定量檢測試劑盒20次非洲綠猴腎；VERO小鼠氧化型谷胱甘肽（GSGS）ELISA試劑盒,

組織硫代酸反應(yīng)物（TBARS）比色法定量檢測試劑盒20次非洲綠猴腎；BS-C-1小鼠抗透明帶抗體（aZP）ELISA試劑盒,

血液硫代酸反應(yīng)物（TBARS）比色法定量檢測試劑盒20次恒河猴胚腎；FRhK-4 [FRhK4]兔子組???型纖溶酶原激活劑（t-PA）ELISA試劑盒,

體液硫代酸反應(yīng)物（TBARS）比色法定量檢測試劑盒20次羅猴胎腎；MA104小鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基（sRANKL）ELISA試劑盒,

名稱規(guī)格VERO衍生株；SVP小鼠生長釋放多肽（GHRP）ELISA試劑盒,

細(xì)胞內(nèi)蛋白氧化（羰基化；carbonyl）比色法測定試劑盒20次SV40轉(zhuǎn)化的非洲綠猴腎；COS-7大鼠磷酸化核因子κB抑制蛋白α（pIKBα）ELISA試劑盒,

組織內(nèi)蛋白氧化（羰基化；carbonyl）比色法測定試劑盒20次非洲綠猴腎系/IgR；VERO/IgR大鼠周期素D2（Cyclin-D2）ELISA試劑盒,

血液蛋白氧化（羰基化；carbonyl）比色法測定試劑盒20次非洲綠猴腎系/IgRCD4+；VERO/IgRCD4+大鼠內(nèi)皮脂肪酶（EL）ELISA試劑盒,

體液蛋白氧化（羰基化；carbonyl）比色法測定試劑盒20次非洲綠猴腎系/IgRCD4-；VERO/IgRCD4-大鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類（MHCⅢ/AgBⅢ/H-1Ⅲ）ELISA試劑盒,

純化線粒體蛋白氧化（羰基化；carbonyl）比色法測定試劑盒20次非洲綠猴腎系/HCV-C；Vero-HCV-C大鼠睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子（CNTF）ELISA試劑盒,

植物蛋白氧化（羰基化；carbonyl）比色法測定試劑盒20次非洲綠猴腎系/HCV-E1；Vero-HCV-E1大鼠血管緊張素Ⅱ（ANG-Ⅱ）ELISA試劑盒,

冰凍切片蛋白氧化（羰基化；carbonyl）染色測定試劑盒10次非洲綠猴腎系/HCV-E2；Vero-HCV-E2豚鼠球蛋白G（IgG）ELISA試劑盒,

細(xì)胞內(nèi)蛋白氧化（羰基化；carbonyl）熒光檢測試劑盒20次非洲綠猴腎系/HCV-p7；Vero-HCV-p7豬髓磷脂堿性蛋白（MBP）ELISA試劑盒,
豬傳染性胃腸炎病毒(TGEV)檢測試劑盒(熒光-PCR法)SCF  小鼠干因子N'N-雙(3-氨基) 98%

TPO  小鼠血小板**素溴鄰苯三酚紅 Indicator

EPO  小鼠促紅**素(S)-(-)-2- 99%

CNTF  小鼠睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子乙基叔丁基 97%

CTLA-4  小鼠T相關(guān)抗原43,4-苯并芘 96%

Cytochrome-C  小鼠色素C2- 98%

Emap-2  大鼠內(nèi)皮單核活化多肽2仲丁 97%

KGF  小鼠角蛋白生長因子2-(2-溴乙基)-1,3-二惡烷 98%

產(chǎn)品留言

標(biāo)題

聯(lián)系人

聯(lián)系電話

內(nèi)容

驗(yàn)證碼

點(diǎn)擊換一張

注：1.可以使用快捷鍵Alt+S或Ctrl+Enter發(fā)送信息!
2.如有必要,請您留下您的詳細(xì)聯(lián)系方式!