產(chǎn)品特點(diǎn)：

1、公司產(chǎn)品僅用于科研不需要單獨(dú)純化線粒體，柱式法純化，操作簡(jiǎn)單快捷。

2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。

3、每107個(gè)動(dòng)物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。

注意：本產(chǎn)品只適合于動(dòng)物材料，不適合于植物材料，因?yàn)橹参锞€粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。

操作流程:

1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔，標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.樣本孔中加入待測(cè)樣本50μL；空白孔不加。

4.除空白孔外，標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

產(chǎn)品組成:

下列是公司正熱銷的產(chǎn)品：

單線態(tài)氧氣（scavenging）活性比色法篩選試劑盒20次兔主動(dòng)脈平滑肌；SMC人黑素瘤衍生亮氨酸拉鏈額外核因子（MLZE）ELISA試劑盒,

細(xì)胞內(nèi)氧化應(yīng)激活性氧（ROS）熒光測(cè)定試劑盒（單線態(tài)氧氣）20次兔主動(dòng)脈平滑??；CCC-SMC-1人伴侶蛋白10（CPN10）ELISA試劑盒,

組織氧化應(yīng)激活性氧（ROS）熒光測(cè)定試劑盒（單線態(tài)氧氣）20次兔角膜后基質(zhì)層成纖維；RCBBF人淀粉樣前體蛋白（βAPP）ELISA試劑盒,

體液氧化應(yīng)激活性氧（ROS）熒光測(cè)定試劑盒（單線態(tài)氧氣）20次兔角膜前基質(zhì)層成纖維；RCFBF小鼠鑰孔蟲戚血藍(lán)蛋白（KLH）ELISA試劑盒,

植物氧化應(yīng)激活性氧（ROS）熒光測(cè)定試劑盒（單線態(tài)氧氣）20次兔眼Tenon＇s囊成纖維；RYTF小鼠白血病抑制因子受體（LIFR）ELISA試劑盒,

單線態(tài)氧氣（scavenging）活性熒光篩選試劑盒20次兔主動(dòng)脈平滑肌；CCC-SMC-2大鼠腦紅蛋白（NGB）ELISA試劑盒,

細(xì)胞內(nèi)蛋白氧化比色法測(cè)定試劑盒20次兔晶體上皮永生系；N/N1003A（RLE）大鼠孕酮受體（PROGR）ELISA試劑盒,

冰凍切片蛋白氧化染色測(cè)定試劑盒10次兔間變表皮鱗癌瘤株；VX2大鼠內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素（visfatin）ELISA試劑盒,

蛋白硝基化染色測(cè)定試劑盒10次兔腎；RK-13大鼠α谷胱甘肽S轉(zhuǎn)移酶（α-GST）ELISA試劑盒,

細(xì)胞內(nèi)核酸氧化（8-Hydroxyguanine）比色法測(cè)定試劑盒20次兔腎；RK13大鼠β淀粉樣蛋白1-40（Aβ1-40）ELISA試劑盒,

冰凍切片核酸氧化（8-Hydroxyguanine）染色測(cè)定試劑盒10次家兔皮膚；DR-S1大鼠高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）ELISA試劑盒,

動(dòng)物細(xì)胞氧化應(yīng)激活性氧（ROS）魯米諾化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒50次家兔腎；RABK3大鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子可溶性受體α（PDGFsR-α）ELISA試劑盒,

細(xì)胞培養(yǎng)懸液氧化應(yīng)激活性氧（ROS）魯米諾化學(xué)發(fā)光法定量檢測(cè)試劑盒50次家兔骨髓間充質(zhì)干；2012083MSC豚鼠白介素6（IL-6）ELISA試劑盒,

純化線粒體氧化應(yīng)激活性氧（ROS）魯米諾化學(xué)發(fā)光法50次羊源豬血管內(nèi)皮鈣粘著蛋白復(fù)合體（VE-cad）ELISA試劑盒,

定量檢測(cè)試劑盒大耳山羊肺；LDG-1鴨病性腸炎病（DEV）ELISA試劑盒,
豬鏈球菌通用型(SS-U)檢測(cè)試劑盒(熒光-PCR法)TGF Beta 2  小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 β 2二苯砜 97%

TGF Beta 1  小鼠轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 β 1苯磺酸鈉 97%

EGF  小鼠表皮生長(zhǎng)因子3-乙酯 98%

EGFR  小鼠表皮生長(zhǎng)因子受體五氧化二銻 AR,95%

ERK1 mouse  小鼠絲裂原活化蛋白激酶1五氧化二銻  99%

mouse-VEGF/ELISA  小鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子五氧化二銻 99.95% metals basis

mouae-VEGF-D  小鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子D五硫化二銻 銻含量:66%

VEGF-R1  小鼠血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1硫化銻 98%

使用方法:

一:培養(yǎng)細(xì)胞預(yù)處理

1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個(gè)培養(yǎng)細(xì)胞,離心收集后棄上清。

2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細(xì)胞兩次,離心得到的細(xì)胞沉淀直接用于mtDNA提取。

二:組織細(xì)胞預(yù)處理

3. 用剪刀將1g新鮮的動(dòng)物組織剪碎(芝麻大小*),轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動(dòng)物組織,因?yàn)閮瞿^程中形成的冰晶會(huì)將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。

三:血液預(yù)處理

4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細(xì)胞層。

5. 用自備PBS洗滌白細(xì)胞兩次,得到的白細(xì)胞沉淀用于mtDNA提取。

柱式動(dòng)物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級(jí))四:mtDNA提取

5.在細(xì)胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。

6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復(fù)顛倒混勻10次。千萬(wàn)不要?jiǎng)×艺袷帯?/span>

7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。

8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。

9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時(shí)的溶液比重較大,有時(shí)候出現(xiàn)沉淀漂浮是正?，F(xiàn)象,取上清時(shí)避開漂浮的沉淀即可。

10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結(jié)合,此步十分重要。

11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。

12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。

注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會(huì)揮發(fā)。

13. 重復(fù)上步1次。

14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會(huì)影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時(shí)不能沉淀到加樣孔中)。

15. 將離心吸附柱置于一個(gè)新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預(yù)熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。

16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。

17. 由于本公司離心吸附柱結(jié)合DNA能力較強(qiáng),如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當(dāng)于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。

18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個(gè)動(dòng)物細(xì)胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。

19. 由于DNA機(jī)械斷裂,電泳時(shí)DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。

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