操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設(shè)置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長處測定各孔的OD值。
產(chǎn)品特點：
1、公司產(chǎn)品僅用于科研不需要單獨純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。
2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。
3、每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。
注意：本產(chǎn)品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。
|
產(chǎn)品名稱
|
禽流感病毒N2亞型(AIV-N2)檢測試劑盒(熒光-PCR法)
|
|
規(guī)格
|
50T
|
|
貨號
|
FS-01P99554
|
產(chǎn)品組成:
|
成分
|
規(guī)格
|
|
溶液A
|
13ml
|
|
溶液B
|
13ml
|
|
溶液C
|
18ml
|
|
離心吸附柱
|
50套
|
|
通用洗柱液
|
50ml
|
|
DNA洗脫液
|
10ml
|
|
說明書
|
1份
|
使用方法:
一:培養(yǎng)細胞預(yù)處理
1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養(yǎng)細胞,離心收集后棄上清。
2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細胞兩次,離心得到的細胞沉淀直接用于mtDNA提取。
二:組織細胞預(yù)處理
3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉(zhuǎn)移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。
三:血液預(yù)處理
4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細胞層。
5. 用自備PBS洗滌白細胞兩次,得到的白細胞沉淀用于mtDNA提取。
柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取
5.在細胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。
6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復(fù)顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。
7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。
8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產(chǎn)生,然后放冰上放置20-25分鐘。
9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現(xiàn)沉淀漂浮是正?，F(xiàn)象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。
10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結(jié)合,此步十分重要。
11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。
12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。
注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發(fā)。
13. 重復(fù)上步1次。
14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。
15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預(yù)熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產(chǎn)量稍微有所降低。
16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。
17. 由于本公司離心吸附柱結(jié)合DNA能力較強,如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當(dāng)于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。
18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。
19. 由于DNA機械斷裂,電泳時DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷的產(chǎn)品：
細胞TUNEL熒光法（Fluorescein）測定試劑盒10次大鼠胰腺外分泌腺腫瘤；AR42J大鼠胰島素（INS）ELISA試劑盒,
冰凍切片TUNEL熒光法（Fluorescein）測定試劑盒10次大鼠嗜堿性粒性白血?。籖BL-2H3豬層連蛋白/板層素（LN）ELISA試劑盒,
石蠟切片TUNEL熒光法（Fluorescein）測定試劑盒10次大鼠腎上腺嗜鉻瘤(低分化)；PC-12(低分化)豬Ⅱ型膠原（Col Ⅱ） ELISA試劑盒,
細胞TUNEL比色法定量檢測試劑盒10/50次大鼠腎上腺嗜鉻瘤(高分化)；PC-12(高分化)豬熱休克蛋白90（HSP-90）ELISA試劑盒,
細胞KUNEL測定試劑盒10次大鼠骨髓瘤；Y3-Ag 1.2.3兔熱休克蛋白20（HSP-20）ELISA試劑盒,
冰凍切片KUNEL測定試劑盒10次大鼠骨肉瘤；UMR-106兔子堿性成纖維生長因子（bFGF）ELISA試劑盒,
石蠟切片KUNEL測定試劑盒10次大鼠骨髓瘤；Y3-Ag 1.2.3抗載脂蛋白抗體A1（Apo A1）ELISA試劑盒--動物，人
藍色熒光細胞核染色分析試劑盒100次大鼠骨肉瘤；UMR-106抑制素B（INH-B）ELISA試劑盒--動物，人
通用型細胞核形態(tài)染色試劑盒100次大鼠腎上腺嗜鉻瘤；PC-12 [PC12]17羥孕酮（17-OHP）ELISA試劑盒--動物，人
PROPIDIUM IODIDE細胞核形態(tài)染色試劑盒100次正常大鼠腎；NRKL-亮氨酸甲酯鹽酸鹽
CHROMOMYCIN A3細胞核形態(tài)染色試劑盒50次大鼠肝瘤；H-4-II-E人α1微球蛋白/bikunin前體（AMBP）ELISA試劑盒,
HOECHST 33342和PROPIDIUM IODIDE細胞膜變檢測試劑盒50次大鼠腎小球系膜；HBZY-1人嗜環(huán)蛋白/親環(huán)素B（CyPB）ELISA試劑盒,
TUNEL流式細胞儀分析試劑盒10次大鼠癌；MADB106人血小板膜糖蛋白Ⅳ（GP-Ⅳ）ELISA試劑盒,
動物細胞/組織細胞色素C釋放凋亡檢測試劑盒10次大鼠胰腺外分泌腺腫瘤；AR42J人主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ類（MHCⅠ/HLAⅠ）ELISA試劑盒,
植物細胞色素C釋放凋亡檢測試劑盒10次AML-193(人急性單核白血病單核)小鼠γ氨基丁酸（GABA）ELISA試劑盒,
禽流感病毒N2亞型(AIV-N2)檢測試劑盒(熒光-PCR法)PIIICP 大鼠III型前膠原肽（C端）對氯甲苯 CP,97%
PIIINP 大鼠III型前膠原肽（N端）4-氯芐基氯 99%
Collagen IV 大鼠IV型膠原鄰氯甲苯 standard for GC,≥99.5% (GC)
Collagen VI 大鼠VI型膠原鄰氯甲苯 AR,98%
HA 大鼠透明質(zhì)酸鄰氯甲苯 99%
LN 大鼠層粘連蛋白鄰氯甲苯 CP
Alpha-IFN－b (humen) 抗大鼠α干擾素受體鄰氯甲苯標準溶液1mg/ml,溶劑:甲,用于水質(zhì)分析
Activin A 大鼠活化素 A鄰氯甲苯 分析標準品,≥99.8% (GC)
- 溫馨提示：為規(guī)避購買風(fēng)險，建議您在購買前務(wù)必確認供應(yīng)商資質(zhì)與產(chǎn)品質(zhì)量。
- 免責(zé)申明：以上內(nèi)容為注冊會員自行發(fā)布，若信息的真實性、合法性存在爭議，平臺將會監(jiān)督協(xié)助處理，歡迎舉報