產品特點：
1、公司產品僅用于科研不需要單獨純化線粒體，柱式法純化，操作簡單快捷。
2、得到的mtDNA可以直接用于PCR和酶切。
3、每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA，每克組織一般能得到3～5μg mtDNA。
注意：本產品只適合于動物材料，不適合于植物材料，因為植物線粒體DNA一般都十分巨大,非常難提。
|
產品名稱
|
三日瘧原蟲檢測試劑盒
|
|
規(guī)格
|
50T
|
|
貨號
|
FS-01P99268
|
操作流程:
1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品50μL；
3.樣本孔中加入待測樣本50μL；空白孔不加。
4.除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液（350μL），靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。
6.每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。
產品組成:
|
成分
|
規(guī)格
|
|
溶液A
|
13ml
|
|
溶液B
|
13ml
|
|
溶液C
|
18ml
|
|
離心吸附柱
|
50套
|
|
通用洗柱液
|
50ml
|
|
DNA洗脫液
|
10ml
|
|
說明書
|
1份
|
使用方法:
一:培養(yǎng)細胞預處理
1. 用自備的0.25%胰酶消化液處理約107個培養(yǎng)細胞,離心收集后棄上清。
2. 用PBS或TBS等緩沖液洗滌細胞兩次,離心得到的細胞沉淀直接用于mtDNA提取。
二:組織細胞預處理
3. 用剪刀將1g新鮮的動物組織剪碎(芝麻大小*),轉移到1.5mL塑料離心管中,用于mtDNA提取。注意:*不要使用凍存的動物組織,因為凍凝過程中形成的冰晶會將線粒體刺破,使其DNA釋放出來被胞漿中的DNA酶降解,影響回收率。
三:血液預處理
4. 將3-5mL抗凝外周血靜置30分鐘或低速離心5分鐘,取白細胞層。
5. 用自備PBS洗滌白細胞兩次,得到的白細胞沉淀用于mtDNA提取。
柱式動物線粒體DNA提取試劑盒(PCR級)四:mtDNA提取
5.在細胞沉淀或剪碎的組織中加入250μL冰浴的溶液A,充分吹打分散。如果是剪碎的組織,不要等成塊的組織溶解即可繼續(xù)下步操作。
6. 加入250μL常溫的溶液B(如果溶液B有沉淀,用前須37℃加熱溶解后冷卻到室溫方可使用),溫和反復顛倒混勻10次。千萬不要劇烈振蕩。
7. 冰上放置6-8分鐘。注意不要超過8分鐘。
8. 加入350μL冰浴的溶液C,溫和混勻4-6次,可見白色沉淀物產生,然后放冰上放置20-25分鐘。
9.室溫12000~15000g離心10分鐘,小心將上清液轉移到離心吸附柱中。由于此時的溶液比重較大,有時候出現(xiàn)沉淀漂浮是正常現(xiàn)象,取上清時避開漂浮的沉淀即可。
10. 靜置5分鐘以讓DNA與離心吸附柱充分結合,此步十分重要。
11.室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中的廢液。
12. 加入500μL的通用洗柱液,室溫12000~15000g離心1分鐘,棄收集管中廢液。
注意:通用洗柱液中含乙醇,用后需要將蓋擰緊存放,否則乙醇會揮發(fā)。
13. 重復上步1次。
14.室溫12000~15000g離心1分鐘,甩干殘留液體。此步不能省略,否則殘留乙醇會影響DNA的后續(xù)使用(如DNA上樣時不能沉淀到加樣孔中)。
15. 將離心吸附柱置于一個新的1.5mL塑料離心管中,加入30-50μL 65-80℃預熱的DNA洗脫液,室溫放置2分鐘。常溫的DNA洗脫液也可以用于洗脫,但產量稍微有所降低。
16.室溫12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即mtDNA。
17. 由于本公司離心吸附柱結合DNA能力較強,如果再加30-50μL DNA洗脫液到離心吸附柱中,往往還能洗脫下很多mtDNA(相當于次洗脫的20-30%),但注意不要使用上步得到的mtDNA溶液來洗脫。
18. 12000~15000g離心1分鐘,離心管底溶液即線粒體DNA。每107個動物細胞一般能得到100ng左右的mtDNA,每克組織一般能得到3-5μg mtDNA。如果DNA需要濃縮,可以使用本公司的核酸濃縮劑。
19. 由于DNA機械斷裂,電泳時DNA可能不呈現(xiàn)專一的帶,但此mtDNA溶液可以直接用于PCR。下列是公司正熱銷的產品：
dCTP 溶液，100mM0.5mL規(guī)格
LAMP 可見光染料1mL圖片
哺乳動物種屬鑒定 PCR Mix100 次價格
φX174RF Ⅰ DNA30μg圖片
GV3101 農桿菌感受態(tài)10×100μL品牌
可溶性兩性霉素 B 溶液 ,20mg/mL1mL圖片
可逆型 Taq DNA 聚合酶抑制劑0.3mL圖片
通用型全基因組擴增試劑盒30 次品牌
ATP 溶液，2.5mM2mL品牌
天凈沙通用型MLPA 試劑盒20 次規(guī)格
Origami（DE3） 感受態(tài)0.1mL×10品牌
Stbl3 感受態(tài)0.1 mL×10圖片
EGY48 酵母感受態(tài)10×100μL規(guī)格
兩管式 RT-PCR 試劑盒 （AMV-Taq）50 次品牌
單全基因組擴增試劑盒30 次規(guī)格
三日瘧原蟲檢測試劑盒CD72/Ly-32/FITC 熒光素標記CD72抗體IgG黑化誘導神經肽 ≥97% (HPLC)
CD74(MHC II )/FITC 熒光素標記CD74抗體IgG人、大鼠 促腎上腺皮質釋放因子 ≥95% (HPLC)
TGF- Alpha /FITC 熒光素標記轉移生長因子–α抗體IgG2-(2-吡啶酮-1-基)-1,1,3,3-四甲基脲四氟酸鹽 99%
TGF- Beta1/FITC 熒光素標記TGF-β1抗體IgG(標記抗體)N,N'-二(芐氧羰基)-L-胱氨酸 98%
TGF- Beta2 /FITC 熒光素標記轉移生長因子–β2抗體IgG二碳酸二叔丁酯 98%
TGF- Beta3/FITC 熒光素標記轉移生長因子–β3抗體IgG二碳酸二叔丁酯 99%
TGF- BetaR1/ALK /FITC 熒光素標記轉移生長因子–β受體1抗體IgG二碳酸二叔丁酯 96%
TGF- BetaR 2/FITC 熒光素標記轉移生長因子–β受體2抗體IgGN,N'-二異基碳二酰亞 98%
- 溫馨提示：為規(guī)避購買風險，建議您在購買前務必確認供應商資質與產品質量。
- 免責申明：以上內容為注冊會員自行發(fā)布，若信息的真實性、合法性存在爭議，平臺將會監(jiān)督協(xié)助處理，歡迎舉報