實(shí)驗(yàn)材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè)
4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè)
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè)
6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺(tái)；
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產(chǎn)品名稱
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規(guī)格
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貨號(hào)
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HUT-78細(xì)胞
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詳見說明書
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FS-X5461
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產(chǎn)品名稱：T**細(xì)胞白血病細(xì)胞
公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保???、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說明。
凍存培養(yǎng)基：
凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。
1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和原代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：
以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。
2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。
3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。
注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。
5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。
6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
柴胡皂苷A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Ilomastat,GM6001,Galardin一氧化氮合成酶-2抗體（誘導(dǎo)型）包裝5g
柴胡皂苷B1（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Guaiacol glycidyl ether干擾素α6抗體包裝1g
柴胡皂苷B2（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： 4-Aminoantipyrine整合素β2/Integrin β2抗體包裝250mg
柴胡皂苷B3(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： N-bromosuccinimide抑制素A/Inhibin βA抗體包裝1g
柴胡皂苷B4英文名稱： Lysostaphin胰島素受體底物-3抗體包裝250mg
柴胡皂苷C（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Thymol胰島素受體底物p53蛋白抗體包裝25g
柴胡皂苷D(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： sulfo-NHS胰島素受體底物-1抗體包裝5g
柴胡皂苷F(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Methylene Blue胰島素受體底物-2抗體包裝25g
柴胡皂苷G(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Valnemulin HCl胰島素受體底物-4抗體包裝5g
柴胡皂苷H(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Tylosin phosphate 白介素14抗體包裝1g
柴胡皂苷I英文名稱： Levofloxacin HCl腫瘤凋亡ASPP家族的另一個(gè)成員抗體包裝25g
蟾靈;蟾酥靈（標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Levofloxacin HClCaspase激活的脫氧核糖核酸酶抑制劑抗體包裝5g
長春里寧英文名稱： Bismarck Brown R胰島素受體α抗體包裝5MG
長春新堿（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Tylosin Tartrate整合素α3β1抗體包裝1g
常春藤苷C(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Tylosin Tartrate整合素β7抗體包裝250mg
HUT-78細(xì)胞猴假單胞菌Human MNX1(Motor neuron and pancreas homeobox protein 1) ELISA KitAlias: MNX1(Motorneuronandpancreashomeoboxprotein1)|HLXB9|HomeoboxproteinHB9ELISAKitReactivity: Human
意大利果殼葉點(diǎn)霉Human OTX2(Homeobox protein OTX2) ELISA KitAlias: OTX2|homeoboxproteinOTX2|MCOPS5|orthodenticlehomeobox2|Orthodenticlehomolog2|orthodenticlehomolog2(Drosophila)ELISAKitReactivity: Human
卵形絲孢酵母Human PIK3CA(Phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit alpha isoform) ELISA KitAlias: PIK3CA|Phosphatidylinositol-4|5-bisphosphate3-kinasecatalyticsubunitalphaisoform|PI3-kinasesubunitalpha|PI3K-alpha|PI3Kalpha|PtdIns-3-kinasesubunitalpha|Phosphatidylinositol-4|5-bisphosphate3-kinase110kDacatalyticsubunitalpha|PtdIns-3-kinasesubunitp110-alpha|p110alpha|Phosphoinositide-3-kinasecatalyticalphapolypeptideELISAKitReactivity: Human
純白環(huán)菇Human S1PR1(Sphingosine 1-phosphate receptor 1) ELISA KitAlias: S1PR1|Sphingosine1-phosphatereceptor1|S1Preceptor1|S1P1|EndothelialdifferentiationG-proteincoupledreceptor1|Sphingosine1-phosphatereceptorEdg-1|S1PreceptorEdg-1ELISAKitReactivity: Human
栗酒裂殖酵母Human PIK3CD(Phosphatidylinositol-4,5-bisphosphate 3-kinase catalytic subunit delta isoform) ELISA KitAlias: PIK3CD|Phosphatidylinositol-4|5-bisphosphate3-kinasecatalyticsubunitdeltaisoform|PI3-kinasesubunitdelta|PI3K-delta|PI3Kdelta|PtdIns-3-kinasesubunitdelta|Phosphatidylinositol-4|5-bisphosphate3-kinase110kDacatalyticsubunitdelta|PtdIns-3-kinasesubunitp110-delta|p110deltaELISAKitReactivity: Human
擬卵蓋鵝膏菌Human GPX2(Glutathione peroxidase 2) ELISA KitAlias: GPX2|Glutathioneperoxidase2|GPx-2|GSHPx-2|Glutathioneperoxidase-relatedprotein2|GPRP-2|Gastrointestinalglutathioneperoxidase|Glutathioneperoxidase-gastrointestinal|GPx-GI|GSHPx-GIELISAKitReactivity: Human
庫爾勒海洋桿菌Human AMELX(Amelogenin, X isoform) ELISA KitAlias: AMELX|Amelogenin|Xisoform|AMG|AMGX|AIH1|ALGN|AMGLELISAKitReactivity: Human
黑曲霉Human APEH(Acylamino-acid-releasing enzyme) ELISA KitAlias: APEH|Acylamino-acid-releasingenzyme|AARE|Oxidizedproteinhydrolase|OPH|Acyl-peptidehydrolase|APH|Acylaminoacyl-peptidase|ARE|ACPH|D3S48E|D3F15S2|DNF15S2ELISAKitReactivity: Human
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。
二．細(xì)胞處理：
1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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