實(shí)驗(yàn)材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個(gè)；
3、50ml離心筒2個(gè) 

4、培養(yǎng)皿1個(gè)，細(xì)胞培養(yǎng)瓶1個(gè) 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個(gè)；無菌玻璃攪拌棒1個(gè) 

6、細(xì)胞計(jì)數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺(tái)；

產(chǎn)品名稱：結(jié)直腸腺癌細(xì)胞

公司細(xì)胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價(jià)格優(yōu)惠、實(shí)驗(yàn)效果好，我司為您提供免費(fèi)代測(cè)服務(wù)，同時(shí)提供新價(jià)格、說明書、規(guī)格、用途、實(shí)驗(yàn)原理等相關(guān)操作說明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細(xì)胞時(shí)必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護(hù)劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細(xì)胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細(xì)胞活力以及解凍后的細(xì)胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細(xì)胞和??代細(xì)胞 (黑色素細(xì)胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細(xì)胞凍存方案：

以下實(shí)驗(yàn)方案介紹了培養(yǎng)細(xì)胞凍存的一般流程。詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方案，必須參閱針對(duì)具體細(xì)胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲(chǔ)存，直至使用。請(qǐng)注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細(xì)胞系。

2.凍存貼壁細(xì)胞時(shí)，利用傳代時(shí)所用方法輕柔地使細(xì)胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細(xì)胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞。

3.采用血球計(jì)數(shù)器、細(xì)胞計(jì)數(shù)儀按照臺(tái)盼藍(lán)拒染法或者使用自動(dòng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀測(cè)定總細(xì)胞數(shù)和活細(xì)胞百分比。根據(jù)所需活細(xì)胞密度，計(jì)算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細(xì)胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動(dòng)細(xì)胞沉淀。

注：離心速度和時(shí)間取決于細(xì)胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細(xì)胞沉淀，將其調(diào)整至該細(xì)胞適合的活細(xì)胞密度。

6.將細(xì)胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時(shí)，應(yīng)不時(shí)輕輕混合細(xì)胞，使其保持均勻的細(xì)胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細(xì)胞，使溫度每分鐘大約降低1°C。或者，將裝有細(xì)胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-β-D-龍膽雙...英文名稱： Pranoprofen型流感病血凝素抗體（H2N2）包裝100g

(+)-兒茶素（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Pranoprofen人巨病UL49蛋白抗體包裝25g

(+)-兒茶素合物（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Albumin(bovine fraction V);BSA人類白抗原E抗體包裝5g

(+)松脂素-β-D-吡喃葡萄糖苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Nalidixic acidE3連接酶抑制素受體3抗體包裝5mg

(-)-Holostyligone英文名稱： Glycogen from oyster魚精蛋白P1抗體包裝250mg

(-)-丁香樹脂酚-4-O-β-D-呋喃芹糖基-(1→...英文名稱： Ethidium bromide(EB)肝生長(zhǎng)因子抗體包裝1g

(-)-丁香樹脂酚-4-O-β-D-葡萄糖苷英文名稱： Besifloxacin HCl組蛋白去乙?；?抗體包裝5g

(2R)-5,7-二氧基二氫黃酮英文名稱： Betaine人乙肝病Large S蛋白抗體包裝100mg

(2R,3R)-3,7,4'-三羥基-5-氧基-8-...英文名稱： BetaineHER4抗體包裝50mg

(2R,3S)-3,7,4'-三羥基-5-氧基-8-...英文名稱： Uric acid原基因1/bri3結(jié)合蛋白抗體包裝1g

(7S,7'R)-雙(3,4-亞二氧苯基)-rel-...英文名稱： Uric acid肝病核心抗原C區(qū)抗體包裝1g

(E)-N-Caffeoylputrescine英文名稱： Domiphen bromide型肝炎病-NS1抗體包裝25g

(R,S)-告依春英文名稱： Betaine monohydrate型肝炎病-NS3抗體包裝5g

(R型)人參皂苷Rg2（標(biāo)準(zhǔn)品）英文名稱： Naphthol AS-D acetate型肝炎病-NS4a抗體包裝100g

(R型)人參皂苷Rg3(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名稱： Zinc protoporphyrinA型病H5N1-M2蛋白抗體包裝25g
COLO320細(xì)胞氧化微桿菌Human LY6G6F(Lymphocyte antigen 6 complex locus protein G6f) ELISA KitAlias: LY6G6F|Lymphocyteantigen6complexlocusproteinG6f|C6orf21|G6F|LY6G6D|NG32ELISAKitReactivity: Human

淤泥大洋芽孢桿菌Human FCGBP(IgGFc-binding protein) ELISA KitAlias: FCGBP|IgGFc-bindingprotein|Fcgamma-bindingproteinantigen|FcgammaBPELISAKitReactivity: Human

釀酒酵母Human PIBF(Progesterone-induced-blocking factor) ELISA KitAlias: PIBF1(Progesterone-induced-blockingfactor1)|C13orf24|chromosome13openreadingframe24|KIAA1008|PIBF|progesteroneimmunomodulatorybindingfactor1|progesterone-inducedblockingfactor1|RP11-505F3.1ELISAKitReactivity: Human

毛木耳(紫木耳、黃背木耳)Human HLA-E(HLA class I histocompatibility antigen, alpha chain E) ELISA KitAlias: MHCE|HLA-E(MajorHistocompatibilityComplexClassIE)|HLA-6.2|HLAE|MHCclassIantigenE|HLAclassIhistocompatibilityantigen|alphachainEELISAKitReactivity: Human

金針菇Human MRC1(Macrophage mannose receptor 1) ELISA KitAlias: MRC1(MannoseReceptorCType1)|CD206|CLEC13D|MMR|CD206antigen|C-typelectindomainfamily13memberD|mannosereceptor|Ctype1|Macrophagemannosereceptor1ELISAKitReactivity: Human

穿孔素假單胞菌Human NARG2(NMDA receptor-regulated protein 2) ELISA KitAlias: NARG2(NMDAreceptor-regulatedprotein2)|BRCC1ELISAKitReactivity: Human

嗜淀粉乳桿菌Human PYY2(Putative peptide YY-2) ELISA KitAlias: PYY2|PutativepeptideYY-2|PutativepeptideYY2ELISAKitReactivity: Human

Human ZFAND6(AN1-type zinc finger protein 6) ELISA KitAlias: ZFAND6(AN1-typezincfingerprotein6)|HT032|AWP1|ZA20D3|AssociatedwithPRK1protein|ZincfingerA20domain-containingprotein3ELISAKitReactivity: Human
細(xì)胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1）準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號(hào)21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲(chǔ)存。

二．細(xì)胞處理：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準(zhǔn)備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。