實驗材料：
1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶
2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個
4、培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個
5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個
6、細胞計數(shù)板1塊；
7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把；
8、酒精燈1臺；
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產品名稱
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規(guī)格
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貨號
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HEM細胞
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詳見說明書
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FS-X5333
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產品名稱：黑色素細胞
來源：黑色素細胞
培養(yǎng)基：DMEM
狀態(tài)：貼壁
公司細胞現(xiàn)貨供應，質量有保證、價格優(yōu)惠、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務，同時提供新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關操作說明。
凍存培養(yǎng)基：
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應含有DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。
1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經過優(yōu)，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。
2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養(yǎng)細胞凍存方案：
以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產品說明書。
1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。
注：離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘撸瑢⒀b有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
桂皮（標準品）英文名稱： Rosolic acid酰肽受體3抗體（脂氧素A4受體）包裝100g
桂枝（標準品）英文名稱： Rosolic acid兜蛋白抗體包裝25g
哈巴俄苷(標準品)英文名稱： Sodium oxalate solution for volumetric analysis脂肪堆積和肥胖相關蛋白抗體包裝500g
哈巴苷(標準品）英文名稱： Thymolblue鳥嘌呤核苷酸交換因子FARP2抗體包裝5g
海風藤（標準品）英文名稱： ThymolblueFK506結合蛋白相關蛋白抗體（他克莫司相關蛋白）包裝1g
海金沙（標準品）英文名稱： Quinaldine Red成纖維生長因子受體1原癌基因伴侶蛋白抗體包裝25g
?？略碥赵?/span>(標準品)英文名稱： Phenolphthalein鈣粘蛋白家族成員7抗體包裝5g
海龍(尖海龍)（標準品）英文名稱： Tetrabromophenol blueⅢ型纖維連接蛋白域蛋白2/5抗體包裝1g
海南冬青苷D英文名稱： Thymolphthalein細絲蛋白A抗體包裝25g
海星（標準品）英文名稱： Thorin磷酸化細絲蛋白A抗體包裝5g
海堿(標準品)英文名稱： Tiron磷酸化細絲蛋白A抗體包裝1g
亥茅酚苷（標準品）英文名稱： TironDNA損傷修復基因XRCC9抗體包裝5g
漢黃芩苷(標準品)英文名稱： TBPE磷酸化細絲蛋白A抗體包裝100g
漢黃芩素(標準品)英文名稱： Tropaeolin O磷酸化磷酸神經膜抗體包裝25g
漢桃葉（標準品）英文名稱： Zincon磷酸化堿性成纖維生長因子受體1抗體包裝500g
HEM細胞*正紅菇Human CK-18/KRT18(CytokeRatin 18) ELISA KitAlias: KRT18|CK-18|CytokeRatin18|KeRatin|typeIcytoskeletal18|KeRatin-18|K18|CellprolifeRation-inducinggene46protein|CytokeRatin-18ELISAKitReactivity: Human
釀酒酵母Human CK-20/KRT20(CytokeRatin 20) ELISA KitAlias: CK-20|KRT20|ProteinIT|CytokeRatin-20(CK-20)|KeRatin-20(K20)|KeRatin|typeIcytoskeletal20ELISAKitReactivity: Human
多汁乳菇Human CYP2A6(Cytochrome P450 2A6) ELISA KitAlias: CYP2A6|CytochromeP450(I)|CytochromeP450(I)|CytochromeP450IIA3|CYPIIA6|Coumarin7-hydroxylase|CYP2A3ELISAKitReactivity: Human
淺黃微桿菌Human CYPA(Cyclophilin A) ELISA KitAlias: CYPA|CYPH|PPIA|Rotamase|CyclophilinA|CyclosporinA-bindingprotein|CYPAMGC12404|CYPH|EC5.2.1.8|MGC117158|MGC23397|peptidyl-prolylcis-transisomeraseA|peptidylprolylisomeraseA(cyclophilinA)|PPIaseA|RotamaseA|TcellcyclophilinELISAKitReactivity: Human
榛針孢酵母Human CYPB(Cyclophilin B) ELISA KitAlias: CYPB|CYP-S1|PPIB|S-cyclophilin|SCYLP|CyclophilinB|cyclophilin-likeprotein||CYPBEC5.2.1.8|CYP-S1|MGC2224|OI9MGC14109|peptidyl-prolylcis-transisomeraseB|peptidylprolylisomeraseB(cyclophilinB)|PPIaseB|RotamaseB|S-cyclophilin|SCYLPELISAKitReactivity: Human
腸膜明串珠菌腸膜亞種Human CYSLTR2(Cysteinyl Leukotriene Receptor 2) ELISA KitAlias: CYSLTR2|CysLTR2|HPN321|G-proteincoupledreceptorGPCR21(hGPCR21)|G-proteincoupledreceptorHG57|PSEC0146|CYSLT2|CYSLT2RELISAKitReactivity: Human
乳桿菌屬Human DGAT1(Diacylglycerol O-acyltransferase 1) ELISA KitAlias: hCG_24006|ARGP1|DGAT|ACATrelatedgeneproduct1|acylcoenzymeA:cholesterolacyltransferaserelatedgene1|diacylglycerolO-acyltransferase1|diglycerideacyltransferase|diacylglycerolO-acyltransferasehomolog1ELISAKitReactivity: Human
副雞嗜血桿菌Human D2R/DRD2(Dopamine Receptor D2) ELISA KitAlias: D2R|DRD2(DopamineReceptorD2)ELISAKitReactivity: Human
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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