實驗材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 

4、培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 

6、細胞計數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺；

產(chǎn)品名稱：角膜內(nèi)皮細胞
來源：角膜；內(nèi)皮細胞；SV40轉(zhuǎn)化；女性

培養(yǎng)基：DMEM

狀態(tài)：貼壁

公司細胞現(xiàn)貨供應(yīng)，質(zhì)量有保證、價格優(yōu)惠、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務(wù)，同時提供新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應(yīng)含有DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復(fù)蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學(xué)成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細胞凍存方案：

以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。

2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞。

3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。

注：離心速度和時間取決于細胞種類。

5.用預(yù)冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。

6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應(yīng)不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘?，將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
可溶性半乳糖苷結(jié)合凝集素16(LGALS16)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)  ELISAKitforLectin,Galactoside-BindingSoluble16(LGALS16)  規(guī)格：48T/96T  進口、國產(chǎn)

踝蛋白2(TLN2)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)  ELISAKitforTalin2(TLN2)  規(guī)格：48T/96T  進口、國產(chǎn)

髓過氧化物酶(MPO)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)  ELISAKitforMyeloperoxidase(MPO)  規(guī)格：48T/96T  進口、國產(chǎn)

中性粒細胞明膠酶關(guān)聯(lián)脂質(zhì)運載蛋白(NGAL)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)  ELISAKitforNeutrophilGelatinaseAssociatedLipocalin(NGAL)  規(guī)格：48T/96T  進口、國產(chǎn)

血管**素樣蛋白6(ANGPTL6)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)  ELISAKitforAngiopoietinLikeProtein6(ANGPTL6)  規(guī)格：48T/96T  進口、國產(chǎn)

硒蛋白P1(SEPP1)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)  ELISAKitforSelenoproteinP1,Plasma(SEPP1)  規(guī)格：48T/96T  進口、國產(chǎn)

隱花色素2(CRY2)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)  ELISAKitforCryptochrome2(CRY2)  規(guī)格：48T/96T  進口、國產(chǎn)

周期素依賴性激酶抑制因子2A(CDKN2A)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)  ELISAKitforCyclinDependentKinaseInhibitor2A(CDKN2A)  規(guī)格：48T/96T  進口、國產(chǎn)

Ⅰ類主要組織相容性復(fù)合體G(MHCG)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)  ELISAKitforMajorHistocompatibilityComplexClassIG(MHCG)  規(guī)格：48T/96T  進口、國產(chǎn)

血小板因子4(PF4)檢測試劑盒(酶聯(lián)吸附試驗法)  ELISAKitforPlateletFactor4(PF4)  規(guī)格：48T/96T  進口、國產(chǎn)
HCA-CS-B4G12細胞Goat Anti-human IgM/PE-CY5  PE-CY5標記的羊抗人IgM規(guī)格 0.1ml

Goat Anti-human IgM/PE-Cy3  PE-Cy3標記的羊抗人IgM規(guī)格 0.1ml

Goat Anti-human IgM/PE  PE標記的羊抗人IgM規(guī)格 0.1ml

Goat Anti-human IgM/HRP  辣根過氧化物酶標記的羊抗人IgM規(guī)格 0.1ml

Goat Anti-human IgM/Gold  膠體金標記的羊抗人IgM規(guī)格 1ml

Goat Anti-human IgM/FITC  FITC標記的羊抗人IgM規(guī)格 0.3ml

Goat Anti-human IgM/Cy7  Cy7標記的羊抗人IgM規(guī)格 0.1ml
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復(fù)蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

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