實驗材料： 

1. 50ml 配制好的RPMI1640培養(yǎng)液1瓶；8ml小牛血清（FCS) 1瓶；100ml 0.25%胰蛋白酶 1瓶；PBS(-)1 瓶 

2. 100ml燒杯2個；
3、50ml離心筒2個 

4、培養(yǎng)皿1個，細胞培養(yǎng)瓶1個 

5、1ml ，200μl移液器各1支；槍頭盒2個；無菌玻璃攪拌棒1個 

6、細胞計數(shù)板1塊； 

7、滅好菌的鑷子1把，剪刀1把； 

8、酒精燈1臺；

產(chǎn)品名稱：骨肉瘤細胞；U-2OS
形態(tài)特性：上皮樣

生長特性：貼壁生長

特征特性：該細胞系(原名2T)是由PontenJ和SakselaE在1964年從一名15歲女孩的脛???中等分化的肉瘤中分離建立的。與WI-38共培養(yǎng)或用抗猴空泡病毒SV40、呼吸道合胞病毒RSV或腺病毒的補體結(jié)合試驗（CF法）未檢測到病毒。該細胞表達胰島素樣生長因子Ⅰ、Ⅱ（IGF-Ⅰ、IGF-Ⅱ）受體和骨肉瘤衍生生長因子（ODGF）。

培養(yǎng)條件：DMEM+10%FBS

傳代方法：1:3~1:6傳代；每周2~3次。

公司細胞現(xiàn)貨供應，質(zhì)量有保證、價格優(yōu)惠、實驗效果好，我司為您提供免費代測服務，同時提供新價格、說明書、規(guī)格、用途、實驗原理等相關(guān)操作說明。

凍存培養(yǎng)基：

凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養(yǎng)基。凍存培養(yǎng)基中應含有DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的完全凍存培養(yǎng)基。

1）細胞凍存培養(yǎng)基是一種用于哺乳動物細胞的即用型完全凍存培養(yǎng)基，其所含胎牛血清和牛血清比例經(jīng)過優(yōu)，可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。 

2）凍存培養(yǎng)基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養(yǎng)基，含10% DMSO，適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。

培養(yǎng)細胞凍存方案：

以下實驗方案介紹了培養(yǎng)細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案，必須參閱針對具體細胞的產(chǎn)品說明書。 

1.配制凍存培養(yǎng)基，于2°C至8°C下儲存，直至使用。請注意使用何種凍存培養(yǎng)基取決于所用細胞系。

2.凍存貼壁細胞時，利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養(yǎng)容器上脫離下來。用該細胞所需完全培養(yǎng)基重新懸浮細胞。

3.采用血球計數(shù)器、細胞計數(shù)儀按照臺盼藍拒染法或者使用自動細胞計數(shù)儀測定總細胞數(shù)和活細胞百分比。根據(jù)所需活細胞密度，計算凍存培養(yǎng)基需要量。

4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液，不要攪動細胞沉淀。

注：離心速度和時間取決于細胞種類。

5.用預冷的凍存培養(yǎng)基重新懸浮細胞沉淀，將其調(diào)整至該細胞適合的活細胞密度。

6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時，應不時輕輕混合細胞，使其保持均勻的細胞懸液狀態(tài)。

7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞，使溫度每分鐘大約降低1°C?；蛘撸瑢⒀b有細胞的凍存管放入凍存盒中，然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。 
卵質(zhì)酶2(OVCH2)elisa檢測試劑盒英文名稱：OVCH2 ELISA Kit，英文縮寫：OVCH2，產(chǎn)品別名：卵質(zhì)酶2(OVCH2)ELISA檢測試劑盒，卵質(zhì)酶2(OVCH2)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

磷酸二酯酶11A(PDE11A)elisa檢測試劑盒英文名稱：PDE11A ELISA Kit，英文縮寫：PDE11A，產(chǎn)品別名：磷酸二酯酶11A(PDE11A)ELISA檢測試劑盒，磷酸二酯酶11A(PDE11A)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

磷脂爬行酶5(PLSCR5)elisa檢測試劑盒英文名稱：PLSCR5 ELISA Kit，英文縮寫：PLSCR5，產(chǎn)品別名：磷脂爬行酶5(PLSCR5)ELISA檢測試劑盒，磷脂爬行酶5(PLSCR5)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

犁鼻1受體3(VN1R3)elisa檢測試劑盒英文名稱：VN1R3 ELISA Kit，英文縮寫：VN1R3，產(chǎn)品別名：犁鼻1受體3(VN1R3)ELISA檢測試劑盒，犁鼻1受體3(VN1R3)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

可溶性半乳糖凝集素3結(jié)合蛋白(LGALS3BP)elisa檢測試劑盒英文名稱：LGALS3BP ELISA Kit，英文縮寫：LGALS3BP，產(chǎn)品別名：可溶性半乳糖凝集素3結(jié)合蛋白(LGALS3BP)ELISA檢測試劑盒，可溶性半乳糖凝集素3結(jié)合蛋白(LGALS3BP)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

人抗單鏈DNA抗體(Anti-ssDNA)elisa檢測試劑盒英文名稱：Anti-ssDNA ELISA Kit，英文縮寫：Anti-ssDNA，產(chǎn)品別名：人抗單鏈DNA抗體(Anti-ssDNA)ELISA檢測試劑盒，人抗單鏈DNA抗體(Anti-ssDNA)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

精脒/精胺N1-乙?；D(zhuǎn)移酶1(SAT1)elisa檢測試劑盒英文名稱：SAT1 ELISA Kit，英文縮寫：SAT1，產(chǎn)品別名：精脒/精胺N1-乙?；D(zhuǎn)移酶1(SAT1)ELISA檢測試劑盒，精脒/精胺N1-乙?；D(zhuǎn)移酶1(SAT1)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

接觸蛋白關(guān)聯(lián)蛋白樣蛋白4(CNTNAP4)elisa檢測試劑盒英文名稱：CNTNAP4 ELISA Kit，英文縮寫：CNTNAP4，產(chǎn)品別名：接觸蛋白關(guān)聯(lián)蛋白樣蛋白4(CNTNAP4)ELISA檢測試劑盒，接觸蛋白關(guān)聯(lián)蛋白樣蛋白4(CNTNAP4)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

膠質(zhì)細胞系來源神經(jīng)營養(yǎng)因子受體α1(GFRα1)elisa檢測試劑盒英文名稱：GFRα1 ELISA Kit，英文縮寫：GFRα1，產(chǎn)品別名：膠質(zhì)細胞系來源神經(jīng)營養(yǎng)因子受體α1(GFRα1)ELISA檢測試劑盒，膠質(zhì)細胞系來源神經(jīng)營養(yǎng)因子受體α1(GFRα1)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

甲狀旁腺素受體1(PTHR1)elisa檢測試劑盒英文名稱：PTHR1 ELISA Kit，英文縮寫：PTHR1，產(chǎn)品別名：甲狀旁腺素受體1(PTHR1)ELISA檢測試劑盒，甲狀旁腺素受體1(PTHR1)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。

激肽釋放酶10(KLK10)elisa檢測試劑盒英文名稱：KLK10 ELISA Kit，英文縮寫：KLK10，產(chǎn)品別名：激肽釋放酶10(KLK10)ELISA檢測試劑盒，激肽釋放酶10(KLK10)檢測試劑盒產(chǎn)品保存：2~8℃、有效期6個月。
U2OS細胞Myosin heavy chain 1  肌球蛋白重鏈抗體規(guī)格 0.2ml

MYOM2  肌間蛋白2抗體規(guī)格 0.2ml

MYOM1  肌間蛋白1抗體規(guī)格 0.2ml

Myoglobin  肌紅蛋白抗體規(guī)格 0.1ml

MyoGEF  肌球蛋白相互作用G蛋白交換因子抗體規(guī)格 0.2ml

MYOG/Myogenin  肌紅蛋白抗體(肌細胞**素)規(guī)格 0.1ml

MyoD1/Myf3  肌原調(diào)節(jié)蛋白抗體規(guī)格 0.1ml
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：

一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；胎牛血清，10%。

2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。

二．細胞處理：

1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。天換液并檢查細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。

對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

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