冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘） → -80 ℃16~18 小時（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲存。*-20 ℃不可超過1 小時， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對象是活細(xì)胞

在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實際需要進(jìn)行人為的控制，同時，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器備。

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

公司優(yōu)勢：

1.具有多年的銷售經(jīng)驗的行業(yè)背景，我司秉承質(zhì)量優(yōu)先的理念，希望廣大科研工作者與我司達(dá)成長期的合作關(guān)系；

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相關(guān)熱銷產(chǎn)品：

白介素2可溶性受體α鏈(IL-2sRα/CD25)ELISA試劑盒3-嗎啉-2-羥基磺酸 99%對叔丁基芐硫 97%鹽酸肼(>98%,BR)

白介素29(IL-29)ELISA試劑盒3-嗎啉-2-羥基磺酸鈉 99%4'-叔丁基-4-氯丁酰苯 98%水合硫酸鐵(> 99%,BR)

白介素28B(IL-28B)ELISA試劑盒氯化硝基四氮唑藍(lán) 98%L-酪氨酸乙酯鹽酸鹽 98%沒食子酸甲酯(>98%,BC)

白介素28A(IL-28A/IFN-λ2)ELISA試劑盒氯化硝基四氮唑藍(lán) 分子生物學(xué)級乙酰苯 AR,99.0%肌激酶(比活性：>200 U/mg,BC)

白介素27(IL-27)ELISA試劑盒茚三酮，水合 AR,95.0%5-芐硫基四氮唑 98.5%磷酸酮酸-環(huán)己鹽(>98%,BC)

白介素26(IL-26)ELISA試劑盒茚三酮，水合 ACS reagent, ≥98.0% (UV)L-腎上腺素 98%（劇品）磷酸二酯酶 II

白介素25(IL-25)ELISA試劑盒5-硝基 98%稱量紙 190mm*250mm，500張/包丁二酰亞(>98%，BR)

白介素24(IL-24)ELISA試劑盒4-氟-7-硝基-2,1,3-苯并氧雜惡二唑 99%檸檬酸酯 98%4-聯(lián)苯單乙酸

白介素23受體(IL-23R)ELISA試劑盒4-硝基-7-哌苯并氧雜惡二唑 98%2-氨基-4，6-二甲基嘧啶 98%5-溴尿苷(>99%,BR)

白介素23A(IL-23A)ELISA試劑盒4-肼基-7-硝基-2,1,3-苯并氧雜惡二唑 98%2-氨基-4，6-二氯嘧啶 98%ADA緩沖液二鈉鹽(>99%,BR)

白介素23(IL-23)ELISA試劑盒1,4-哌二乙磺酸 99%4,6-二甲基-2-巰基嘧啶 98%無蛋白酶牛血清白蛋白

白介素22(IL-22)ELISA試劑盒哌-N,N-雙(2-羥基烷磺酸) 99%4,6-二氯嘧啶 98%六水氯化鋁

白介素21(IL-21)ELISA試劑盒苯甲基磺酰氟 ≥98.5% (GC)N,N′-二苯基-N,N′-(3-基)-1,1′-聯(lián)苯-4,4′-二（TPD）硬脂酸鋁

白介素2(IL-2)ELISA試劑盒對二甲苯二聚體 99%浴銅靈  98%氟化銨(>95%,BR)

白介素1受體樣1(IL1RL1)ELISA試劑盒對磷酸二鈉 98%2-溴芴 97%對甲氧基苯甲(>98%,BR)

白介素1受體相關(guān)激酶-4(IRAK-4)ELISA試劑盒5’-磷酸吡哆,一水 98%浴銅靈 purified by sublimation, 99.99% trace metals basis鉍試劑III(>99%,BR)
大鼠滑膜間充質(zhì)干細(xì)胞O1群霍亂弧菌

種屬: Vibrio│cholerae O1

提供形式: 凍干物

**等級: 3

模式菌株: no

應(yīng)用領(lǐng)域: O1/classical　稻葉(Inaba)

培養(yǎng)基: CM0116

生長條件: 37℃

瓊氏不動桿菌

種屬: AcinetobacterjuniiBouvetandGrimont

**等級: 1

模式菌株: no

培養(yǎng)基: 2

生長條件: 37℃

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