冷凍保存細(xì)胞之方法？

冷凍保存方法一: 冷凍管置于4℃ 30~60 分鐘→ （-20 ℃30 分鐘） → -80 ℃16~18 小時(shí)（或隔夜） → 液氮槽vaporphase 長期儲(chǔ)存。

冷凍保存方法二: 冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3 ℃ 至–80 ℃ 以下， 再放入液氮槽vapor phase長期儲(chǔ)存。*-20 ℃不可超過1 小時(shí)， 以防止冰晶過大，造成細(xì)胞大量死亡，亦可跳過此步驟直接放入-80℃ 冰箱中，惟存活率稍微降低一些。

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn)：

1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞

在實(shí)驗(yàn)過程中，根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力，并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況，包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。

2.研究條件可以人為控制

pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件，可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制，同時(shí)，可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察，這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。

3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性

通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞，需要時(shí)，可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器備。

培養(yǎng)操作：

1）復(fù)蘇細(xì)胞：將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加 入 4mL 培養(yǎng)基混合均 勻。在 1000RPM 條件下離心 4 分鐘，棄去上清液，補(bǔ) 加 1-2mL 培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培 養(yǎng)過夜（或?qū)?細(xì)胞懸液加入 10cm 皿中，加入約 8ml 培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。天換液并檢查細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。      

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的 PBS 潤洗細(xì)胞 1-2 次。

2. 加 1ml 消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于 37℃培 養(yǎng)箱中消化 1-2 分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消 化。  

3. 按 6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在 1000RPM 條件下離心 4 分 鐘，棄去上清液，補(bǔ)加 1-2mL 培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細(xì)胞懸液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3）細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為類；

1. 細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，細(xì)胞變圓 脫 落后，加入 1ml 含血清的培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2. 4 min 1000rpm 離心去掉上清。加 1ml 血清重懸細(xì)胞，根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加 入血 清和 DMSO，輕輕混勻，DMSO 終濃度為 10%，細(xì)胞密度不低于1x106/ml，每支凍存管凍存 1ml 細(xì)胞懸液，注意凍 存管做好標(biāo)識(shí)。

3. 將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80 度冰箱，2 個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取.

公司優(yōu)勢：

1.具有多年的銷售經(jīng)驗(yàn)的行業(yè)背景，我司秉承質(zhì)量優(yōu)先的理念，希望廣大科研工作者與我司達(dá)成長期的合作關(guān)系；

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相關(guān)熱銷產(chǎn)品：

多球蛋白受體(poly-IgR)ELISA試劑盒硒粉 99.9% metals basis,200目對(duì)叔丁苯  95%吐溫80(化學(xué)純)

多聚血清蛋白(PHSA)ELISA試劑盒二氧化硒 AR，99%氯乙酰氯 98%吐溫80(藥用級(jí))

多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)ELISA試劑盒碲 99.99% metals basis氯乙酰氯 CP,97%吐溫80(培養(yǎng)級(jí))

多聚ADP核糖聚合酶(PARP)ELISA試劑盒4-二甲氨基吡啶 99%乙基乙二酰氯酯 98%亞鐵(AR)

多功能蛋白聚糖(VS)ELISA試劑盒N-羥基鄰苯二甲酰亞 98%草酰氯 98%葡萄糖酸(AR)

多功能蛋白聚糖(versican)ELISA試劑盒2-巰基-5-甲基-1,3,4-噻二唑 99%氧氯化磷 AR,99.0% (劇品)PF-562271

多巴色素異構(gòu)酶(DT)ELISA試劑盒2-巰基苯并咪唑 98%氧氯化磷 電子級(jí)（劇品）海藻酸鈉

多巴脫羧酶(DDC)ELISA試劑盒鄰苯二甲酰亞 99%度米芬 97%酸鈉

多巴-β羥化酶(DBH)ELISA試劑盒異硫酸苯酯 98%環(huán)胞霉素A 98%膠原酶I型(sigma)

多巴D2受體(D2R)ELISA試劑盒異硫酸苯酯 99%, 蛋白測序級(jí)2,3-二甲氧基苯甲酸 99%膠原酶II型(sigma)

多巴D1受體(D1R)ELISA試劑盒異硫酸苯酯 99%,用于HPLC標(biāo)記3,4-二甲氧基苯甲酸 99%膠原酶IV型(sigma)

多巴(DA)ELISA試劑盒疊氮鈉 AR,99%（劇品）2,4-二羥基苯甲酸 98%鉬酸鈉二水(AR)

對(duì)氧磷酶-3(PON3)ELISA試劑盒2,3,5-三酚 98%3,4-二羥基苯甲 98%對(duì)氨基苯甲酸(AR)

對(duì)氧磷酶(PON)ELISA試劑盒三乙二乙 85%3,4-二羥基苯甲 分析標(biāo)準(zhǔn)品，≥99%對(duì)氨基苯甲酸(標(biāo)準(zhǔn)品)

對(duì)稱二甲基精氨酸(SMDA)ELISA試劑盒內(nèi)消旋-2,3-二巰基丁二酸 98%異香蘭酸 97%硅酸鎂（高純）

對(duì)氨基苯甲酸(PABA)ELISA試劑盒0.983-甲氧基苯甲酸 CP,98.0% L-抗壞血酸鈉
UMNSAH/DF-1細(xì)胞黃瘤孢

種屬: Sepedonium│chrysospermum

提供形式: 凍干物

**等級(jí): 1

模式菌株: no

培養(yǎng)基: 0014

生長條件: 25-28℃

存儲(chǔ)條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

枯草芽孢桿菌

種屬: Bacillus│sublitis

提供形式: 凍干物

**等級(jí): 1

模式菌株: no

應(yīng)用領(lǐng)域: 春雷霉素測定菌

培養(yǎng)基: 0002

生長條件: 30℃

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