當(dāng)今發(fā)展出各色各樣的PCR擴(kuò)增技術(shù)，各色各樣的高溫聚合酶，就是來(lái)解決PCR擴(kuò)增中遇到的擴(kuò)不出、擴(kuò)增效率低的問(wèn)題。如巢式PCR就是擴(kuò)增那些拷貝數(shù)很低的基因片段。 有些重復(fù)片段的擴(kuò)增, GC含量高的片段，非要采用特殊擴(kuò)增手段才能擴(kuò)增出了。

引物擴(kuò)增不出，主要是下列兩種情況比較常見(jiàn)：

1、 RT-PCR。 請(qǐng)注意，很多基因通過(guò)常規(guī)RT -PCR方法是很難擴(kuò)增出來(lái)的。 RT- PCR成功的關(guān)鍵在于RT的反應(yīng)的RNA質(zhì)量和目標(biāo)基因在特定組織和細(xì)胞中含量。

2、從基因組中擴(kuò)增。 一般情況下，基因在基因組中都是單拷貝，基因組作為模板需要嚴(yán)格控制用量?；蚪MDNA過(guò)高，會(huì)影響反應(yīng)體系中的Mg和pH