1、 細(xì)胞樣品在提取前需要使用PBS清洗兩遍，以減少培養(yǎng)基對(duì)樣品的干擾，懸浮細(xì)胞可500Xg低速離心后收集進(jìn)行蛋白提取。貼壁細(xì)胞可在培養(yǎng)器皿中直接進(jìn)行蛋白提取。蛋白提取前建議進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，以確定提取中添加裂解液的比例，得到很佳提取效率。

2、 組織樣品在提取前也需要用PBS清洗，一些含血量豐富的組織，建議使用紅細(xì)胞裂解液去除紅細(xì)胞，以避免血液中IgG對(duì)后續(xù)實(shí)驗(yàn)的影響。

3、為了防止蛋白降解、去磷酸化，各種蛋白酶抑制劑、磷酸酶抑制劑都是必須的。

4、 在提取蛋白的時(shí)候僅僅靠裂解液有時(shí)候也不能達(dá)到完全抽提的效果，有條件的話，可以對(duì)抽提懸液進(jìn)行超聲破碎處理；超聲的時(shí)候，因?yàn)槌暟l(fā)熱損傷蛋白，需要把要超聲的樣本放到冰水混合物里。

5、此外如果沒有裂解buffer，可以用1×SDSloading buffer代替來抽提蛋白，其效果類似于SDS裂解液，不過抽提后的樣本不能進(jìn)行濃度測(cè)定。

6、 蛋白煮沸變性一般是95-100°C，5-10min，水浴鍋煮沸時(shí)，可用帶夾EP管防止EP管蓋彈開，使水浴鍋內(nèi)的水進(jìn)入而使樣品廢掉。