哪些是qPCR探針設計的一般原則:
1、擴增片段的長度不應太大,一般小于300bp。
2、探針不能和任一引物互補,且其長度在保證特異性的前提下盡可能的短,長度不要超過30bp。
3、探針的Tm值至少比引物的Tm值高5度
4、探針如用于檢測多態(tài)位點,多態(tài)位點應盡可能靠近探針中部
5、探針5’端不能是堿基G,G對熒光基團有猝滅作用。