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ELISA夾心法實驗步驟及優(yōu)缺點

夾心ELISA是一種實驗技術,其中抗原成為兩種抗體之間的"三明治"中心。該方法在以下步驟中展開:

實驗步驟:

步驟一:捕獲抗體吸附:將第1抗體吸附在微孔板孔中,形成夾心結構。

步驟二:洗滌和封閉:在洗滌和封閉后,添加含有待檢測抗原的樣品。

步驟三:結合第2抗體:第2抗體結合樣品中抗原的另一位點。通常,第2抗體是與某種酶偶聯的抗體,用于后續(xù)檢測。

步驟四:添加酶底物:在洗滌板孔之后,引入酶底物,短時間內孵育后,通過讀板機測定每個孔的信號。

夾心法優(yōu)缺點:

1、優(yōu)點:

  • 高特異性,使用的捕獲抗體和檢測抗體都具有檢測特異性。
  • 適用于復雜樣品,抗原不需要進行純化即可用于檢測。
  • 靈活性更大,靈敏度更高,可采用直接法也可采用間接法。

2、缺點:

  • 檢測物需要擁有兩個以上不同的抗原表位或多個相同的重復表位。
  • 價格較貴,耗時較多。