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公司新聞

包被抗原板，然后用3%的MPBS室溫封閉2h，PBS洗滌。
在一排試管中，利用有限稀釋法建立從0.1 nmo/L~1μmol/L濃度梯度的抗原PBS溶液，加入抗體溶液（濃度≤0.5μmol/L）使總體積為100μl。
室溫孵育30min后，加90μl反應(yīng)混合物到前述已包被抗原的微孔中，微孔中預(yù)先加人30%的MPBS 30μl后孵育，但時(shí)間不宜超過10min（時(shí)間不宜過長，過長會導(dǎo)致混合物中反應(yīng)平衡體系被破壞，zui 終實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確）。充分洗滌抗原板。
加入酶標(biāo)二抗，孵育1h，PBS洗滌。
加入顯色底物顯色，顯色30min后加入終止液停止反應(yīng)，進(jìn)行OD值讀數(shù)。
抗原濃度較低時(shí)，反應(yīng)平衡后[A]較大，被抗原板捕獲的游離抗體多，信號強(qiáng);當(dāng)抗原濃度高時(shí)，反應(yīng)平衡后[A]較小，被抗原板捕獲的游離抗體少，信號弱;當(dāng)抗原濃度髙到一定程度時(shí)，將沒有信號。在zui 強(qiáng)信號一半時(shí)的狀態(tài)為半飽和狀態(tài)，此時(shí)[A]=[AB]，Kd=[B]≈[B]總。將測得的OD值記錄，結(jié)合梯度稀釋的抗原濃度繪制擬合曲線，zui 終找到zui 強(qiáng)信號一半的點(diǎn)，對應(yīng)的抗原濃度即解離常數(shù)Kd。