細(xì)胞培養(yǎng)的基本步驟：

1、原代培養(yǎng)：從供體內(nèi)取出組織，經(jīng)機(jī)械或消化分離成單個(gè)細(xì)胞或單一型細(xì)胞群，在無(wú)菌、適當(dāng)溫度和營(yíng)養(yǎng)條件下，生存、生長(zhǎng)和繁殖。簡(jiǎn)單步驟為：剪切組織-消化分離-擴(kuò)增培養(yǎng)。

2、傳代培養(yǎng)：當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到80%~90%時(shí)，去掉培養(yǎng)基，用PBS清洗，加入胰蛋白酶消化，分離細(xì)胞，再按一定比例接種到新的培養(yǎng)瓶中。一般2～3d后應(yīng)換一次生長(zhǎng)液。

3、體內(nèi)細(xì)胞培養(yǎng)：將瘤細(xì)胞懸液接種到動(dòng)物體內(nèi)，形成腫瘤，再?gòu)哪[瘤中分離細(xì)胞，進(jìn)行培養(yǎng)。

4、細(xì)胞凍存：將細(xì)胞懸液與凍存液按一定比例混合，裝入凍存管，放入-80℃冰箱，若需長(zhǎng)期保存需要再轉(zhuǎn)移到液氮中。

5、細(xì)胞復(fù)蘇：將凍存細(xì)胞從液氮中取出，迅速在37℃水浴中解凍，加入預(yù)熱的含血清的培養(yǎng)基，離心，棄上清液，加入新的培養(yǎng)基，放入孵箱中，培養(yǎng)。凍存與細(xì)胞復(fù)蘇需要遵循慢凍速溶的原則。