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qPCR?試驗無Ct值出現(xiàn)原因及解決方法

qPCR試驗無Ct值出現(xiàn)原因及解決方法:

1、檢測熒光信號的步驟有誤:

一般染料法采用72℃延伸時采集,探針法則一般在退火結(jié)束時或延伸結(jié)束采集信號。
2、引物或探針降解:

可通過PAGE電泳檢測其完整性。
3、模板量不足:

對未知濃度的樣品應(yīng)從系列稀釋樣本的zui高濃度做起。
4、模板降解:

避免樣品制備中雜質(zhì)的引入及反復(fù)凍融的情況。
5、反應(yīng)循環(huán)數(shù)不夠:

一般都要在35個循環(huán)以上,可根據(jù)實驗情況增加循環(huán),但高于45個循環(huán)會增加過多的背景信號。