qPCR試驗無Ct值出現(xiàn)原因及解決方法: 1、檢測熒光信號的步驟有誤:
qPCR試驗無Ct值出現(xiàn)原因及解決方法:
一般染料法采用72℃延伸時采集,探針法則一般在退火結(jié)束時或延伸結(jié)束采集信號。 2、引物或探針降解:
可通過PAGE電泳檢測其完整性。 3、模板量不足:
對未知濃度的樣品應(yīng)從系列稀釋樣本的zui高濃度做起。 4、模板降解:
避免樣品制備中雜質(zhì)的引入及反復(fù)凍融的情況。 5、反應(yīng)循環(huán)數(shù)不夠:
一般都要在35個循環(huán)以上,可根據(jù)實驗情況增加循環(huán),但高于45個循環(huán)會增加過多的背景信號。