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大鼠細胞傳代操作步驟

大鼠細胞傳代操作步驟:

細胞密度達到80-90%時即可傳代。
1、棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗-2次;
2、加入2ml0.25%T25瓶),使覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
3、-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
4、將細胞懸液000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
5、用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
6、懸浮細胞直接離心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。